[求救] 請教石蠟切片破洞問題

[karine424 (恬)]

大家好 第一次發問 已經搜尋過板上的文章 也google過

想請教大家石蠟包埋切片一直破片的問題

最近發現好像比較大塊一點的檢體或是含有脂肪組織的檢體

都容易破片 而且是一個大洞 像照片裡這樣

https://drive.google.com/file/d/0B3I2jzG2HDoMTHZ6NkEtOTh3bVk/view?usp=sharing

檢體是用10%中性福馬林固定一天

脫水過程(機器Leica TP1020):

梯度酒精(75% >95% >95% >100% > 100% >100%) > xylene >xylene > wax> wax> wax

接著就石蠟包埋 放冰上約20-30分鐘後再進行粗切及細切

有嘗試過

(1)換新刀片切(feather的跟leica的刀片都試過)-->失敗

(2)蠟塊冰久一點-->失敗

(3)3um,4um,5um各種厚度-->失敗

(4)脫水機的酒精跟xylene全部換新-->失敗

想請教大家 是不是還有哪裡可以改進?

謝謝大家指教~~

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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 111.248.171.28
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※ 編輯: karine424 (111.248.171.28), 09/09/2016 12:29:13
推 freelight: 請問您泡每個梯度酒精,Xylene 和Wax之間的時間多久?
→ freelight: 看起來像是蠟沒有進到組織裡面
→ freelight: 或許可以加長每個buffer浸泡的時間看看~
→ karine424: 每個梯度酒精xylene, wax都是一個小時!
→ karine424: 請問如果要延長的話,是每一缸時間都加長嗎?30min?1hr?
→ freelight: 要看你的組織大小調整 一般來說越大要越久
→ freelight: 然後每個濃度可以增加換的次數 讓buffer可以完全平衡
推 goshr: 最簡單的計算方式, 1mm厚度的檢體要泡1小時,
→ goshr: 然後, 脂肪多的檢體, 泡蠟over night會有很大的幫助
→ goshr: 但缺點是其他的部分會變更硬, 尤其是豬皮的部分
推 yu2012: 1mm厚度的檢體要泡1小時,是指的是泡蠟嗎？之前的脫水步驟
→ yu2012: 正常嗎？
推 ayenyayaya: 福馬林有問題？
→ ayenyayaya: Commercial buffer 不是完全沒問題的 被陰過
→ karine424: 謝謝大家 我把蠟塊再拿去泡蠟2hr 有變比較好切
→ karine424: 因為有時間壓力 所以只多泡了2hr 太感謝各位高手~