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我是依照RANi core的protocol先用293T cell做病毒液(使用TransIT-LT1系統),接著加polybrene和先前製作的病毒液做shRNA knockdown infection到P19 cell。 一開始都長得好好的,因為我想收細胞做western blot確認是否knock down成功,但是我一使用trypsin後,細胞就飄著不貼了(連作為control的shGFP也是)。也有試過直接收原盤的細胞,但不知道是不是因為polybrene的關係,刮細胞的時候整盤稠稠的。 想請問一下有沒有人也遇到同樣的問題,或尋求可能我哪裡出錯了。 ps. 我沒有用puromycin篩選細胞 ----- Sent from JPTT on my iPhone -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 140.113.206.159 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1473649393.A.980.html
melaleuca: 之前做沒有這樣的問題耶.. 你的Polybrene濃度放多少啊 09/12 13:03
melaleuca: ? 09/12 13:03
nicolehui: 我polybrene的濃度放8ug/ml 09/12 17:17
nicolehui: 那你是直接收原盤的細胞嗎? 09/12 17:17
darrenyo: 有做過polybrene毒性測試嗎? 09/12 17:25
nicolehui: 沒有耶!但我在infection隔天換新的medium後到trypsin 09/12 17:45
nicolehui: 前都還長好好的。這樣可能是polybrene的濃度太高嗎? 09/12 17:45
darrenyo: 不確定耶..沒遇過這狀況 只是我之前做 RNAi core建議 09/12 18:28
darrenyo: 做之前先做polybrene毒性測試 網站上也有protocol 09/12 18:28
nicolehui: 好的!我來做polybrene的毒性測試,謝謝你! 09/14 10:30
cocoHsuan: 去問問你家學長看看吧 09/30 17:27