[求救] 組織免疫螢光染色

[darkdoor (嘆息之門)]

最近的實驗是將帶有螢光dye 脂類物質打入小鼠，看其組織的吸收，

因為老闆想看是組織中何種細胞吃進了螢光物質，所以進行了免疫螢光染色，

遇到的問題是染色的過程中需要使用 Triton-X 100 打洞，但是

會造成那個 dye 的消失，不打洞的話抗體又染不上去，

不知道各位前輩有沒有一些特別的做法，可以請教一下，

謝謝。


--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 1.162.241.244
※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1478950692.A.708.html
→ MDCCLXXVI: 染細胞表面的marker?
補充說明一下，抗體有特定而且不是細胞表面的，所以無法更換
※ 編輯: darkdoor (1.162.241.244), 11/12/2016 21:18:37
推 tynse71864: 使用弱一點的 detergent 並降濃度  如 saponin,CHAPS
→ tynse71864: fix bfr是 PFA?
是PFA沒錯
※ 編輯: darkdoor (42.72.252.217), 11/13/2016 17:29:39
推 Ianthegood: 用organic solvent fix?
→ Ianthegood: 啊大概也會把你的dye洗掉
推 tharaohfu: 冷凍切片可試試用-20度C的methanol fix
→ tharaohfu: 這樣可以不用打洞 不過還是得試試看
推 tynse71864: organic  之前試 ICC ,油類會全部洗掉噢
→ enjorus: 有機溶劑類的，油類很多都會被洗掉呀。不過原PO的狀況中
→ enjorus: 如果有切片的話，那個厚度應該會小於一顆細胞厚度。
→ enjorus: 所以可以試看看跳過打洞那步。