作者kaofei (phoebe)
看板Biotech
標題[求救] glycerol stock不能用
時間Fri Dec 2 09:58:40 2016
想請問，我之前Constuct plasmid的菌液，加入15% glycerol後冰-80
最近想重抽plasmid，就取了50 ul加進3 ml的LB(Amp) broth裡去增菌然後抽mini
o/n後菌看起來很多，但抽起來很少...2 ml抽到30 ng/ul而已
我有確認不是我抽mini的問題，因為不同的菌液有的glycerol stock就抽很好 = =
我想想會不會是我當初保存菌液太不謹慎了...沒有切完RE就趕快凍起來
好像拖了個兩三天...
我嘗試劃菌後挑single colony
但菌長得很少，看起來也沒很健康
我目前還想得到的方式就是拿之前的plasmid重新transformation
只是因為比較麻煩點，又會浪費competent cell (雖然自製的算便宜...)
不曉得版上大大還有沒有其他的建議
謝謝！
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→ blence: 就重新transform而已 12/02 10:01
→ blence: 不過如果你的是low copy,這個量也算正常 12/02 10:03
→ Ianthegood: 30應該很夠用吧? 12/02 21:02
→ kaofei: 是可以用，但覺得Amount有點低，感覺那個濁度應該可以破百 12/02 22:24
→ xxtomnyxx: 把你抽到的拿去切 RE 看看，我覺得有可能是污染了 12/03 16:10
→ kaofei: 恩...我也是這樣想的Orz因為切了看起來量很少，雖然大小對 12/03 19:41
→ xxtomnyxx: Plasmid 大小對，假設 plasmid 是正確的，我會猜要不是 12/03 21:18
→ xxtomnyxx: 那個細菌根本不是 compentent E.coli，要不就是細菌因 12/03 21:19
→ xxtomnyxx: 某種原因突然老化了，總隻看起來只能重新 transform 了 12/03 21:20
→ kaofei: 嗯嗯，了解，謝謝XD" 12/05 07:54