[求救] IHC. 陽性呈色淡

[x30621 (1232131213)]

最近做IHC. 用vector DAB去呈色，陽性有出來但是很淡的說

一抗目前是1：100
二抗是1：200

其實一二抗都有是著調過更濃的比例
還是一樣

其實之前有做過幾次陽性深的，但是是偶爾出現

藥劑也換新的了

一直都很淡，DAB放到10分鐘，也是而且背景很紅

之前很深陽性是一放下去馬上就變紅中棕色了

請問各位指點一下ORZ



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→ im9527tw: DAB是新鮮現泡的嗎？
→ x30621: 對啊 先泡的
推 susu8n0: Buffer pH值多少?
→ susu8n0: 可以試試0.015M Tris buffer, pH7.4
推 abcam: 不會是一抗 or 二抗的問題嗎？
→ abcam: 二抗 為何是有比例？不是IHC 專用二抗嗎？
推 susu8n0: 我想原po需要把整個染色步驟po出來，我們才有辦法幫你
推 susu8n0: 修改一下上面推文:0.15M Tris buffer, pH7.4才對