[求救] 用TRIzol LS Reagent 萃取DNA 品質低落

[LinNereus (Nereus)]

各位前輩麻煩指導一下小弟我，

小弟我是化學系而非生科相關科系，

但因為實驗上需要所以有在萃取DNA，

我們樣品都是全血經由kit組萃取，

但後來因老闆的方向，希望在同一樣品萃取出RNA和DNA，

所以選用TRIzol LS Reagent作為萃取試劑。


萃取DNA的步驟是：

(前面TRIzol LS Reagent 用 4mL)

1. 之前萃取完RNA後的tube裡面含有中間層及有機層還有殘餘水層去做離心。

2. 離心後去除水相。(會稍微吸掉一些有機層，但也不太確定有沒有完全去除水層。)

3. 加入2mL 100% EtOH (用手上下反覆搖晃均勻，靜置3min。)

4. 離心 2000g, 7min, 4度。

5. 倒掉上層液體，留下沉澱。(這邊沉澱一大坨，很像檳榔渣。)

6. 加入5.5mL的 0.1M sodium citrate in 10% ethanol並震盪使沉澱脫離tube底部。

7. 室溫靜置30min，後離心 2000g, 5min, 4度。

8. 移除液體，留下沉澱。

9. 6~9步驟重複三次。

10. 加入9mL 75% EtOH，搖晃震盪後靜置室溫,20min。

11. 離心 2000g, 5min, 4度，後移去液體留下沉澱。

12. 10~11步驟重複三次。(此時很像檳榔渣的沉澱仍然在。)

13. 真空抽乾5~10min。

14. 加入400 uL 8mM NaOH 回溶。

15. 離心 1200g, 10min, 4度。

16. 把含DNA的液體吸出轉移到新tube。(有用0.22um小飛碟過濾，因為大沉澱還在。)


把液體拿去測吸收算濃度，得到結果如下：
http://imgur.com/a/nbZSG

小弟不知道為什麼濃度會如此之高，然後品質如此低落...

實驗室沒有學長姐用TRIzol做過萃取RNA或DNA，

一開始懷疑是否是有機溶劑或鹽類殘留，所以75% EtOH那邊洗了3次，

但是結果還是一樣，整個大崩潰Q-Q...

想請教有經驗的前輩給個指導，

或者是告知我我步驟哪裡錯誤。


謝謝各位。



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→ Ice9: DNA 不夠純啊。步驟5和6之間，可以多一點phenol-chloroform
→ Ice9: 的步驟。另外，樣本不夠分成兩半，一半用TRIzol抽RNA，一半
→ Ice9: 用其他方法抽 DNA 嗎？
→ sunorange: 同時抽RNA和DNA本來效果就不太好 。最好的就是樓上的
→ sunorange: 做法
→ Ianthegood: trizol抽dna效果本來就很糟
推 tynse71864: 順帶一提  抽蛋白也不太好
→ lesswind: trizol抽dna效果本來就很糟+1
推 ko363630: Trizol不是主要用於RNA isolation嗎？而且你的步驟也少
→ ko363630: 了CHCl3與IPA沈澱