[求救] transfection的效率可持續多久？

[lb00202549 ()]

用lipofectamin 2000做transfection來over expression gene，第一次是收48hr的6cm dish量的細胞跑WB，效果非常好，無論是293T或是lung cancer cell都很好。

但是第二次做的時候，條件改為48hr的時候將6cm dish culture放大到10cm dish等待長滿後收下protein跑WB，發現完全跟control的表現一樣...完全沒有over expression...

不知道問題出在哪裡...
是不是因為經過一代culture，所以....失效？

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推 sdjk: Transfection送進去的都因為繼代稀釋掉
→ sdjk: 直接用10cm半滿transfection?
→ xxtomnyxx: 要看你用的細胞還有 vector，以及有沒有做 selection
→ xxtomnyxx: 建議你用一樣的 vector 表現 EGFP，這樣你就可以用螢光
→ xxtomnyxx: 追蹤細胞表現的狀況。
推 nellnell: 看你描述是transfect 48小時後放大到10cm dish, transie
→ nellnell: nt transfect最佳表現是24-48小時, 中間經過一次繼代,
→ nellnell:  又放兩三天等他長滿, 效力過了沒表現很正常吧
推 tynse71864: 我通常30h就收了  最多48h
→ untilnow: RTFM
推 GG810424: 四到五天都沒問題，看plasmid,看gene 類型,跟dish size
→ GG810424:  無關