[求救] Transfection 的問題

[whatupmen (jia)]

各位  前輩們你們好
小弟最近  有做transfection
把一個  帶有microRNA的plasmid 轉染至癌細胞中,這是實驗室第一次做這類的實驗，然
後有些疑問想問問大家，我使用的是jetPRIME 的藥劑。

我一直有個疑問，reagent：DNA的比例，DNA的單位都是ug，但我的plasmid是用kit的elu
tion buffer回溶，如果抽取plasmid濃度不同如：1000ng/ul 或 200ng/ul，假設同樣tra
nsfection DNA濃度都是 1ug ，這樣一個加1ul一個是5ul，同樣是轉染1ug一個細胞要再
多承受4ul的elution buffer(plasmid 回溶)，不知道會不會對細胞產生毒性，還是說沒
有差？


也順便問問各位如果transfection時，plasmid濃度都大概多少？







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→ blence: elution buffer一般都是水或Tris buffer阿
→ blence: 如果擔心,何不用elution buffer調成濃度一致
→ whatupmen: 我後來就有把濃度調成一樣，當然plasmid抽出來時濃度越
→ whatupmen: 高越好，代表要加入細胞的體積比較少，但想問問各位 tr
→ whatupmen: ansfection前，抽plasmid的濃度都多少 (一直擔心elutio
→ whatupmen: n buffer在細胞含量太高 哈哈)
→ a90648: 你就想想水和tris要多少才會造成細胞毒性？
→ xxtomnyxx: 用 mini 和 midi 抽的就算用同樣的 buff 調成一樣濃度
→ xxtomnyxx: ，做 transfection 效率也會有差。如果可以盡量都用
→ xxtomnyxx: midi 抽到的 DNA 來做。Mini 抽到的通常沒有 midi 純。
→ tynse71864: 我都調成1ug/ul耶  至多0.5ug/ul~
→ tynse71864: 我都抽 maxi
→ MDCCLXXVI: elution buffer會是無菌的嗎？
→ tynse71864: 會過.22 fil  ; kit組附的理論上是 (TE也不太會長東西
→ tynse71864: 吧
推 GG810424: 抽midi or maxi 1ul 2ug 以上 看下多少再調整
→ GG810424: 可以fb 搜尋 G葛格的生命科學小教室
→ GG810424: 歡迎來發問踢館