→ blence: 附圖沒marker看不懂 12/10 09:33
→ blence: 每個size都有最適合的gel%,如果%過低,actin也是會糊掉的 12/10 09:37
上圖是actin 43的
下圖是parp 89/116
推 tynse71864: 咦你只有一片吸水紙？ 不是兩片嗎 12/10 13:06
我這次只放一片，比較薄，之前用原場的比較厚所以都用一片。
推 lail: 70kd可以跑10%，比較美 12/10 15:14
謝謝^^本來要同時壓17的 所以用12% 是否有點太貪心XD
推 tz2733: 看不太懂問題 是指小分子跟70kDa以上都糊 只有actin(42左 12/10 22:42
沒錯沒錯，就是這樣。
→ tz2733: 右)是正常的 這樣嗎? 12/10 22:42
推 iyorain: 給你參考~60v跑1hr 100v跑2.5hr 注意保冷 小分子跑比較久 12/11 01:07
→ iyorain: 過熱膠會溶掉 transfer 180ma 80分鐘 12/11 01:07
感謝! 跑膠的條件試試看，可是有個小疑問180ma ??
※ 編輯: virusgg (223.138.64.86), 12/11/2016 08:37:41
※ 編輯: virusgg (223.138.64.86), 12/11/2016 08:38:43
※ 編輯: virusgg (223.138.64.86), 12/11/2016 08:40:15
※ 編輯: virusgg (223.138.64.86), 12/11/2016 08:41:42
※ 編輯: virusgg (223.138.64.86), 12/11/2016 08:42:59
→ blence: 如果會過熱溶膠請檢查一下buffer,因為比原po更長的條件我 12/11 09:37
→ blence: 們都在用,另外"小分子跑比較久",這應該是寫錯了 12/11 09:43
推 tz2733: 作膠時下膠底部有時會有很小氣泡 仔細看才看得出來膠有點 12/11 11:09
→ tz2733: 波浪狀 所以跑到太底部的話小分子蛋白就會歪七扭八的 然 12/11 11:09
→ tz2733: 後12%同時看你要的大中小分子是ok的 猜測是否transfer時 12/11 11:09
→ tz2733: 膠融了? actin 看起來ok只是因為它量多......只是猜測 12/11 11:09
→ tz2733: 給你參考 12/11 11:09
推 tynse71864: 12%膠應該沒問題 我可以從17壓到120 12/11 15:51
推 htLiu: 可能是Transfer時溫度太高 12/13 12:21
推 biotip: 看起來可能是1抗體專一性問題2定量未準確3蛋白質可能表現 12/13 16:14
→ biotip: 量有問題 若有興趣可以寫信biotip@outlook.com 可再分析 12/13 16:17
推 iyorain: transfer時我不會調那麼高~會低於180mA 12/13 20:15
→ virusgg: 發現溫度偏高就會開始糊，在跑SDSPAGE的時候，就發現make 12/14 12:09
→ virusgg: r糊了，60v 20min 110v 95min。 12/14 12:09
→ virusgg: 大家若遇到壓出來，有的很乾淨有的很髒，明明操作都同時 12/14 12:26
→ virusgg: ，且髒的還沒有要的band會先 12/14 12:26
→ virusgg: 1.一抗比例調高 12/14 12:26
→ virusgg: 2.wash時間加長為一小時，10分鐘換一次 12/14 12:26
→ virusgg: 3.換抗體 12/14 12:26
→ virusgg: 4.先去大吃一頓再說...== 12/14 12:26
推 tz2733: 跑膠就溫度太高 請確認你的running buffer及膠配方 有沒 12/14 18:19
→ tz2733: 有錯 這電壓條件跑膠應該ok 12/14 18:19
→ virusgg: running buffer是買的，不會錯吧== 12/14 19:11
推 tz2733: 稀釋倍數錯誤也是有可能發生的呀~~ 12/14 20:16
→ roy047: 同意樓上, 10倍稀釋有時變成9倍, 11倍稀釋之類QQ 12/15 03:07
→ blence: 自行google會看到running buffer真的有兩種,主要差異在 12/15 11:38
→ blence: glycine,分別是192mM與250mM 12/15 11:38
→ virusgg: 謝謝大家，那天要稀釋20x running buffer時特別觀察一下 12/21 23:38
→ virusgg: ，竟然發現放在下層4℃冰箱中的buffer 結冰了== ，結了 12/21 23:38
→ virusgg: 一層冰，看建議儲存是4℃~25℃，我還放蠻底下的冰箱門邊 12/21 23:38
→ virusgg: 。所以果然是稀釋倍率問題。 12/21 23:38