[求救] NIPAM成膠問題

[lyonalaya (槿花未開)]

增加第二次失敗未成膠的藥品用量


先提一下，我不是生醫相關科系的，我是機械系QQ

主要是想把這材料拿去應用在其他MEMS部分

可是因為從來沒接觸過這方面的東西，實驗室也沒人懂...

所以不知道該問誰Orz


使用的藥品有N-isopropylacrylamide、APS、NMBA、TEMED

第一次的比例

N-isopropylacrylamide 1200mg→600mg
APS                   26mg  →13mg
NMBA                  50mg  →25mg
TEMED                 40ul  →20ul
DI water              20ml  →10ml

第一次是有成膠的，但是實在是不記得確切的凝膠時間

這次再做，把所有藥品減半

丙且想試著提高溫度加速凝膠時間

做了兩組對照，一組是室溫的，一組是加熱70度

70度那組因為沒加蓋所以水分蒸發乾掉了

室溫那組...過24小時來看，發現還是液體狀態QQ


另外我爬了一下文，看到好像APS受潮的話會影響效果

可是我第一次做的時候，藥品裡面好像就有結塊了(廠商給我的時候就有了)

當時我沒想太多就直接用了

除了N-isopropylacrylamide存放冰箱之外，其他藥品都是室溫保存放在藥品櫃

廠商給的時候沒有特別說要怎麼存放，我就把他當成其他藥品一樣放室溫了

請問到底是我的藥品有問題還是配方有問題QQ


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→ lyonalaya: 拜託有沒有知道的大大幫忙解救我一下QAQ不一定要一樣
→ lyonalaya: 的藥品，相關成膠資料也好
推 huangsw: APS跟TEMED一起加？ 你有先後順序嗎？
→ lyonalaya: 有，N-isoprpylacrylamide>NMBA>APS>TEMED
→ lyonalaya: 有先等粉末溶解完之後再加下一個藥品
推 koala30135: 有mix均勻嗎
→ lyonalaya: 有搖晃攪拌等粉末看不見再繼續，第一次跟第二次都是用
→ lyonalaya: 磁石攪拌均勻的，但是第二次的膠到現在都還沒有固化
→ blence: 在加APS與TEMED時，用磁石攪拌的時間分別有多久？
APS放進去大概攪拌一兩分鐘的時間，然後再滴TEMED

推 tz2733: 沒作過這種膠 但SDS-PAGE作很多>< 想說我們都是把APS泡成
→ tz2733: 水溶液(新鮮配或配大量分裝冰-20一次解凍一小管) 作膠時
→ tz2733: 倒數第二個加下去 稍微混勻後加TEMED就趕快注膠 不知你的
→ tz2733: 這種膠這樣處理會不會比較容易凝 給你參考
請問你們APS粉末都是怎麼保存的Q___Q
我們冰箱沒有到-20這麼低溫
APS放一般藥品櫃而已，這樣會壞嗎
APS泡成溶液是用莫耳濃度算嗎？

推 supray: acrylamide會先跟buffer混好  APS先配成10%的
→ supray: 通常加進去稍微混合一下  10分內就凝了
→ supray: 這凝膠的速度是不會有等粉末溶解的時間的
→ supray: 感覺是錯過凝膠的timing了
→ supray: 然後要做較稀的膠 我們只會減少acrylamide的量
因為第一次做的時候也是這樣的，查到這個配方的文獻也是說大概要24小時會凝膠
buffer是交聯劑之類的嗎QAQ？
還是會不會是交聯劑變質Orz
另外想請問多少的單體要搭配多少的APS溶液
※ 編輯: lyonalaya (1.163.79.187), 12/20/2016 00:49:02
※ 編輯: lyonalaya (1.163.14.188), 12/20/2016 01:55:49
推 tz2733: APS我們都封parafilm放乾燥箱 為了減少打開次數所以配大量
→ tz2733: 10%水溶液 分裝小管冰-20 冰3個月內應該都還可以用 不要
→ tz2733: 反覆解凍(一般冰箱冷凍庫大概也可以吧。。。)
推 tz2733: 以前每次作膠前開罐新鮮配APS  大概一年多後膠就凝不起來
→ tz2733: 了(凝膠時間越拖越久) 你新買的APS應該還沒這麼快失效 有
→ tz2733: 些結塊也還正常 通常都買最小包裝的 壞了整罐丟也不心疼
10%水溶液是用什麼算的QAQ重量？莫耳？
我那時候買上面寫98%，這樣是還要乘0.98嗎Orz
※ 編輯: lyonalaya (1.163.14.188), 12/20/2016 09:08:03
推 tz2733: 我是1gAPS+10ml水這種算法><  另外可查SDS-PAGE配方 同樓
→ tz2733: 上提到的 調整膠濃度時不是所有東西都減同樣倍數
好，我再做一批有成功那次的配方試試看，如果沒問體應該就是不能減半QAQ
另外，老師昨天說，現在一直沒有膠化的液體再多加APS跟TEMED，看能不能讓它成膠，這
有可能成功嗎→__→？
※ 編輯: lyonalaya (1.163.14.188), 12/20/2016 09:47:43
推 tz2733: 看配方表 好像越低濃度膠的APS跟TEMED要加比較多量ㄟ...
→ tz2733: 我也不知道再加會不會凝你可試試
看來我的表達能力有問題讓大家都誤會了QQ
我所有都有減半(包括水)，我以為這樣子單體的莫耳濃度是沒有變的
→ blence: 原來你的減半是只有藥品減半,水體積還是20ml
→ blence: APS,TEMED用量要維持1/1000,不要更動
→ blence: 時間過了未成膠的也別用了,失效了
不好意思讓大大誤會了，我水的用量也有改變，上次20ml這次10ml
因為想說要維持原配方的濃度，所以大家一起減半這樣濃度才會一樣
減半的原因是想要做出比較少的膠，因為模具容量沒有20ml這麼多
所以把所有東西減半，想說這樣可以得到一樣濃度10ml的膠
APS跟TEMED的用量1/1000是跟什麼相比@@?水的體積嗎?
※ 編輯: lyonalaya (1.163.79.187), 12/20/2016 11:23:30
※ 編輯: lyonalaya (1.163.79.187), 12/20/2016 11:27:54
推 tz2733: 照理說你這樣減半應該要ok呀 也許是攪拌擾動到吧 加油囉
凝膠時不能晃動嗎？
我好像等待時除非我不在學校，不然沒幾小時就會去晃晃看有沒有固化
該不會是這原因吧OAO
※ 編輯: lyonalaya (1.163.14.188), 12/20/2016 23:36:59
推 tz2733: 因為SDS-PAGE很快10-30min就凝 加上注入玻璃夾層也不方便
→ tz2733: 搖 所以我們會多配些 剩下的放著 如果剩下的凝了(會搖一下
→ tz2733: 看看) 那膠應該也凝了 沒機會一直搖膠 不知一直搖是否會影
→ tz2733: 響
→ blence: 在PAGE中,APS跟TEMED的用量約1/1000是相較於總體積
→ blence: 一直去晃動(搖)就不會凝了,所以最前面才問磁石是否攪太久
→ blence: 另外以PGAE來看,無封閉(保持空氣暴露)也會比較慢凝成膠
想請問一下，相較於總體積1/1000，是1ml應該有1mg的APS嗎？
我查網路上SDS-PAGE配方，好像20ml要有0.1ml的10%APS，這樣好像沒有符合1/1000？
是我算錯還是這兩個是不一樣的不能通用？
另外想問，APS多加對於膠體聚合成膠會有影響嗎？
例如太多會不能凝膠之類的
※ 編輯: lyonalaya (42.73.92.25), 12/21/2016 11:01:52
→ blence: http://cshprotocols.cshlp.org/content/2006/1/pdb.tab11
→ blence: 以SDS-PAGE,最常參考的molecluar cloning所提供的比例
推 koala30135: APS越多凝越快，用過20%的APS對SDS-PAGE膠體品質沒影
→ koala30135: 響只是凝很快
好，謝謝各位大大的幫助OuO
明天試試看APS泡10%溶液，看能不能順利凝膠
如果還是不能的話搞不好真的試藥品出問題了Orz
※ 編輯: lyonalaya (111.248.4.14), 12/21/2016 21:53:17