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各位好 這陣子都在進行酵切要將接於T-vector上的目標基因給切下來 並接到表現載體上,但是直到現在都沒辦法切下來 加入XhoI或NdeI單一切時都能切動 但是當加入另外一個酵素時就會自己黏回去原本的大小 兩種酵素都是最近剛新訂的 目標基因(約900bp) 切位為XhoI及NdeI(NEB) 使用的bf為CutSmart Buffer(NEB) 37度C、1小時、6小時、24小時 因為卡很長很長一段時間了 希望有人能給些建議QQ 非常感謝大家耐心看到這裡(跪) -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 218.173.131.121 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1482256836.A.5FC.html
milkpa: 請先確定東西有在T-vector裡,定序或PCR都行 12/21 08:12
blence: 麻煩秀圖,秀大小 12/21 09:33
denovo: 直接做double digestion試看看如何 12/22 00:47
satasumi: 切完一支有先純化後再切下一支嗎? 01/05 06:17
chou0315: enzyne加太多?glycerol濃度太高會導致切不動。 02/27 09:49