作者greenseed (綠子)
看板Biotech
標題[求救] 無法從T-vector切下目標基因
時間Wed Dec 21 02:00:33 2016
各位好 這陣子都在進行酵切要將接於T-vector上的目標基因給切下來
並接到表現載體上,但是直到現在都沒辦法切下來
加入XhoI或NdeI單一切時都能切動
但是當加入另外一個酵素時就會自己黏回去原本的大小
兩種酵素都是最近剛新訂的
目標基因(約900bp)
切位為XhoI及NdeI(NEB)
使用的bf為CutSmart Buffer(NEB)
37度C、1小時、6小時、24小時
因為卡很長很長一段時間了
希望有人能給些建議QQ
非常感謝大家耐心看到這裡(跪)
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推 milkpa: 請先確定東西有在T-vector裡,定序或PCR都行 12/21 08:12
→ blence: 麻煩秀圖,秀大小 12/21 09:33
→ denovo: 直接做double digestion試看看如何 12/22 00:47
→ satasumi: 切完一支有先純化後再切下一支嗎? 01/05 06:17
→ chou0315: enzyne加太多?glycerol濃度太高會導致切不動。 02/27 09:49