[求救] WesternBlot的Band結果判讀?!

[geltukou (一生一世)]

想請問版友們是否有碰過這樣的情況?

目前實驗室做Western Blot結果，常碰到這樣的問題
操作上大致沒有問題，1%BSA配製抗體，稀釋倍數依說明書上的指示
說明書上也會標出表現出的band會在多少kDa的位置
但是做出的結果，最明顯的band表現，卻與說明書標示的位置不符，常常會偏高

說明書上顯示為14kDa，此抗體為monoclonal antibody
http://imgur.com/kurneKz

但做出來最明顯的band卻在20kDa左右，原定的14kDa反而不清楚或根本沒有band
http://imgur.com/FV4o4fy

之前思考或許是各家marker的標示位置不同，換過兩三家不同的marker仍有相同的狀況
並非只有發生在此抗體，已經做過好幾個一抗均是如此的結果...
而且也不是只有一家廠商，大部分都是monoclonal antibody....(囧)))

請遇到相關經驗的版友能給我們一點意見，
是因為它是monoclonal antibody，基本上就相信它顯示最明顯的band
或是有其他方式可以確認呢?

謝謝大家。



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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 120.107.71.57
※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1482288154.A.349.html
→ lail: overexprrssion?放positive control？基本上這種位置差蠻遠
→ lail: 的band我就不相信了，即使是使用單株抗體也一樣…
我們目前也覺得不能相信差太多的明顯band~但是做幾次都是這樣~TAT
請問常用的positive control是指哪個呢?
※ 編輯: geltukou (120.107.71.57), 12/21/2016 13:02:59
推 GG810424: 有問題請去fb搜尋（G葛格的生命科學小教室）詢問，WB真
→ GG810424: 的需要多練習與經驗
→ lail: 看看別人用過那個細胞會很明顯表達你要看到蛋白質啊，用它
→ lail: 當positive
→ geltukou: 好的！謝謝大家回答
→ htLiu: 放一組positive control就知道位置了
推 icheee: 你的系統裡是看 endogenous 的嗎？或是 fusion protein?