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有人有用過嗎? 我想clone一段5600 bp左右的序列到pJET vector,然後轉型到top10擴增 但這段gene好像有toxic sequence,菌都長很差不然就是insert錯誤 試過室溫培養感覺效果沒甚麼改善QQ 所以想試試看別的細菌Strain 查資料看到BL21(DE3)pLysS好像可以耐toxic sequence 用他似乎可行? 然後我不是要做蛋白質表現的,純粹是Clone以後收藏起來 不知道有沒有人有類似經驗的可以提點一下orz,謝謝! -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 140.112.4.208 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1482749443.A.51B.html ※ 編輯: kaofei (140.112.4.208), 12/26/2016 18:51:12
storm780121: 印象是c41 c43吧?雖然他們主要不是保存質體用的…另 12/26 20:12
storm780121: 外想問你的vector是哪個呢? 12/26 20:12
storm780121: 阿 沒事 當我沒問 哈哈 12/26 20:14
biingru: 要注意有沒有 recA knockout 否則會重組 promotor 12/27 00:47
biingru: 不建議用BL21(DE3)當insert保存 12/27 00:48
blence: top10跟DH10B像,可以用來保存這大小的vector 12/27 06:28
blence: 而且你的vector可能也沒有可在top10表現的promoter 12/27 06:31
blence: sequence很不穩定機率大,而可能不是表現出來有毒 12/27 06:35
※ 編輯: kaofei (140.112.4.192), 12/27/2016 11:28:07
kaofei: 回bilingru,為什麼不建議呢?如果有pLyss?還沒很懂這些 12/27 11:32
kaofei: 細菌的strain的差異... 12/27 11:32
kaofei: 回blence:會說有毒是看其他paper說的(研究同個virus) 12/27 11:34
kaofei: 那想請問如果sequence不穩定,有甚麼方法可以克服嗎? 12/27 11:34
Ianthegood: 看不太懂,你如果只是要收plasmid當然盡量不要進 12/27 19:46
Ianthegood: expression strain啊, dh5a, dh10b, xlgold這些先試吧 12/27 19:47
silverberry: 保存載體不建議放到表現菌株。請選用I大推薦的載體 12/28 06:37
silverberry: 保存菌株來做clone吧 12/28 06:37