[求救] 想請問mmp-9 在Western 的實驗

[jacky255257 (jacky)]

各位大大好

小弟已經試了好久

在du145的細胞中

跑western 看 mmp9的表現

可是不同家的抗體似乎抓起來效果都很難抓的感覺

不是沒有band 不然就非常非常弱 不然就很雜

不知道有沒有大大指點.....

謝謝!!

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→ lail: 有沒有考慮做RNA或是gelatin assay(看活性的)
推 GG810424: Total protein 你下多少ug
→ GG810424: 你有positive control cell lysate 嗎？
→ jacky255257: 我下了80ug.  沒有control
→ jacky255257: 目前還不會弄到RNA跟其他的方法
→ lail: 印象中MMP9的western不好做，也有可能是因為分泌出去了
推 GG810424: 你google MMP-9 antibody 看到 U937的那張圖，想辦法弄
→ GG810424: 個positive control
→ GG810424: 你membrane 是什麼材質的?
→ GG810424: 你transfer 多久 什麼電壓 還有電流？
→ GG810424: 做幾%的gel
→ GG810424: 厚度？
→ GG810424: 抗體titer怎麼下？
→ GG810424: 你有問題可以加我FB : Tong Yu Hu
→ GG810424: 我可以幫你一層一層剖析問題
推 vancent: mmp只有幾個可以做WB
→ blence: 都能把MMP9講出來了,卻不順便講是試過哪些不好用
推 GG810424: 我從來沒有買過MMP-9 antibody 唷
→ GG810424: 實驗不用做我也能判斷抗體的好壞
→ GG810424: 我碩班用過200支以上抗體，這是經驗，你可以買abcam 的
→ GG810424: 而且我沒有必要告訴你答案，我告訴你答案，永遠都學不會
→ GG810424: ，我是啟發式教學
→ blence: 我在說原po啦
→ blence: 有些人不說基因,是不希望透露研究主題,但目前的沒這顧慮
→ lail: Abcam的抗體倒不是我的首選，使用經驗不佳
推 tynse71864: 我也不愛 abcam…偏貴
→ blence: Abcam太多OEM,同一支貨,賣價必然貴一些,整併後的thermo
→ blence: 也在學;不過上面abcam說的兔單株EPR吧? 是併epitomics來的
→ blence: 算是自產,品質比較穩定,價格也不貴,應該可以獨立出來評價
推 virusgg: 不知道genetex跟 cell signaling的抗體好嗎?
推 machin: 如果沒有一定要定量,推做活性測試(gelatin assay)隨便查
→ machin: paper都有實驗方法
推 tynse71864: 我也推gelatin assay; 但如果真要定量還是要有抗體阿
→ tynse71864: ～
→ tynse71864: 另外抗體購買還是看 citeab或 biocompare比較穩;大廠
→ tynse71864: 某些抗體就是特別難用，所以直接找前人引用較安全
→ cyc5566: 啟發式教學是啥鬼= =
推 mandible: MMP 這種東西跑western 和 gelatin assay 定義是不一樣
→ mandible: 的哦！要看您問什麼問題！
推 lail: 測量也可以用elisa試試看