細胞存活率實驗問題

[s9527543 (s9527543)]

發問時請注意，若是要問實驗相關的問題，請將實驗的步驟、所用的條件大致列出
以方便板友幫您追蹤問題

若是求救事項涉及實驗室智慧財產(例如細胞細菌植株、質體載體等）之分讓，
請務必註明貴實驗室願意設立 正式合作或 簽署材料分讓協議(MTA)，否則版工將逕行刪除

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我目前是大二上剛結束,進實驗室也有2個月開始跟實驗到現在有些問題不太了解,也找不
太到合理的答案所以在這邊問一下,實驗室目前是在做藥物促進細胞凋亡來抑制癌細胞生
長的實驗,現在剛接觸到細胞存活率實驗MTT,實驗步驟是:
種細胞在24well>>>貼附16小時>>加藥後分別等24,36,48小時以MTT測細胞存活率,有些問
題想請教:

(1)MTT的濃度是5mg/ml,作用時候會用DMEM以1:9的比例稀釋配成   300ul/well加到
24well反應1小時,但是在收24小時時間點時候的   control組,570nm測OD值一定會out,這
麼一來就沒辦法很準確判斷   24小時IC50,種細胞是25000/well,但是也不能將細胞數降
太低請   問有什麼辦法可以解決?

(2)下藥24well為1ml的DMEM含不同同度的藥物,如果說1ml的劑量只能   維持到36小時,而
48小時OD開始回升,那為什麼不直接把劑量提高   就好呢?

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推 Bows: 1. 降細胞數 or 增加回溶MTT的溶液的體積(DMSO or 1%SDS)
→ Bows: 48 hr OD是什麼OD? 提升劑量會增加 mistarget 的風險
→ Bows: 另外有些藥就是放到一定時間就會壞掉
→ a90648: 藥會失效就看要12或24小時換一次含藥的medium阿
→ a90648: 直接提高劑量那低濃度的效果不就沒data?
→ s9527543: 所以DMSO用量沒有固定的意思嗎
→ tynse71864: DMSO太多細胞會掛喔!
→ s9527543: 我是指MTT之後 用DMSO去溶解紫色結晶這部分