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如題 小弟表現一個蛋白 原本溶於8M urea 進行透析到4M就開始沉澱 到2M 都沉澱差不多了。 用的是PBS+10%甘油+0.1mM EDTA +0.1mM pmsf PH=8的透析液 不把尿素透到0就無法進行下個實驗 有哪裡可以改善嗎?謝謝 ----- Sent from JPTT on my Asus ASUS_T00N. -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 223.139.189.111 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1484739390.A.D51.html
Ianthegood: 溫度? 01/19 03:45
4度c
huangsw: 你的蛋白有雙硫鍵嗎? 01/19 10:01
有 兩個 ※ 編輯: kerber56 (223.139.157.29), 01/19/2017 22:59:55
Ianthegood: 可以試試室溫 有些蛋白怕冷 01/19 23:12
謝謝您 我會試試 ※ 編輯: kerber56 (223.139.157.29), 01/19/2017 23:48:04 ※ 編輯: kerber56 (223.139.157.29), 01/19/2017 23:48:17
huangsw: 如果你起始在8M Urea, 請用re folding的概念去處理 01/20 14:44
huangsw: 濃度不宜高, 不同分子間雙硫鍵接起來恐怕也不是你要的 01/20 14:44
huangsw: 另外,如果是E. coli表現的, 雙硫鍵有很大機會是錯的 01/20 14:46
huangsw: 記得多做實驗確認一下. 不然投稿會被戰翻... 01/20 14:47
Ianthegood: 對耶完全忘記你這是refolding 01/20 19:15
Ianthegood: 你如果要做biophysics的話 做refolding真的好嗎? 01/20 19:16
storm780121: 有his taq嗎?有的話可以嘗試on column refolding 01/21 17:14