如何改善蛋白aggregation?

[xy234786 (阿亮)]

我要純化的蛋白是利用pET21b送入BL21plus去overexpresssion，並利用column去純化大量的蛋白，此蛋白是陰道鞭毛蟲的rubrerythrin蛋白，它是一種鐵離子結合蛋白，大小連同his tag前後的residue，大概24kDa，而實驗目的是要去結出這蛋白的結晶，分析它的結構，不過，最近發現此蛋白可以大量被細菌表現並純化出來，然而在後面置換及濃縮蛋白的過程中，發現此蛋白相當容易arregation，很困擾，因為如果純化蛋白的質及量不好，便會影響後續養晶的成功性，好困惱啊，我只是碩班生，老師就要我解結構???，各位大大，有沒有什麼辦法解決啊～

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→ milkpa: 本實驗室的研究生也都在解結構，沒什麼。找一下buffer條
→ milkpa: 件、改變induce溫度等等，需不需要additive等等，都試試看
→ Ianthegood: 看原文expression沒有問題 問題在後面處理
→ Ianthegood: 怎麼換buffer的啊? amicon, dialysis?
→ milkpa: 從破菌開始就可以換了，不一定要死守單一buffer
→ milkpa: 從low salt、high salt、super high salt開始，各種添加物
→ milkpa: 都行，方法很多，其實搞不好鐵離子加下去就解決了
推 huangsw: 推樓上, 如果已知會跟離子結合 可以的話, 有一點比較好
→ Ianthegood: 喔建議要有plan B喔 如果解不出來要有別的東西可以寫
→ Ianthegood: 論文XD
推 darit: 增加Glycerol的濃度5~10% 或者加長或縮短蛋白長度
→ darit: 加2-ME或TCEP對某些蛋白也有幫助