推 helen82323: 測試用GAPDH跑完的結論是...我會從頭用GAPDH當interna 03/07 17:18
→ helen82323: l control 從收sample, 定量全部重做.... 03/07 17:18
→ helen82323: 謝謝你建議 03/07 17:18
※ 引述《helen82323 (弦)》之銘言：
: 抽活體組織蛋白質，也用BCA測濃度，但是每次跑western的internal control都不是一樣粗
: 我是做不同發育時間點的該組織表現量，然而每次都是發育早期的兩三個時間點internal control很粗，後期的control很細
: 我用的control是B-actin
: 補充一點，因為被這個問題困擾很久，有測過用lysis buffer稀釋sample和用ddH2O稀釋sample的比較，結果用ddH2O稀釋的誤差比lysis buffer小很多，兩種稀釋方法都試過，但actin還是不一樣粗
: 我的sample是WT，沒有任何處理
: 請問這個問題要怎麼解決？？？
data永遠是對的
你確定你的組織在發育早期晚期細胞數量跟大小可以這樣比較嗎?
總protein expression的量也一樣?
如果你的細胞morphology不一樣那你的actin很自然的也會不一樣
如果你真的很確定你每個時間點的actin是一樣的
你有足夠的evidence說actin可以拿來當internal control
那你就不要用total protein量做standardisation啊
不想額外跑個eliza就用western的band做standardisation再跑一張
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 131.111.5.161
※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1487956375.A.26F.html