[求救] 請問如何分析ECM的成分？

[LIAR (玻璃做的大叔)]

請問如果想知道細胞分泌且吸附在材料的ECM種類，應該要如何處理？

我有種fibroblast或endothelial cell，雖然試過triton+氨水來decellularized，
但後續的進行就很不順利。如果用螢光染，就是一整片訊號，無法確定
是不是背景訊號，也沒有型態可言，而且不同材料，原本背景也不同。

而我用RIPA像是跑western去收下來，定量幾乎定不到，就算種再多盤，但
lysis buffer也會等比例增加，濃度上不去，目前染色也染不到，
想送mass人家至少希望有band位置才能比database。

請問ECM protein的分析，我應該要怎麼處理比較好？

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"Don't hate the player. Hate the game."
當看到哪個名人賺了大錢，領到高額補助或利息，不要去指責他，
而是要指責那個制度、創造那個制度的人，以及默許那個制度的人。

不然你認為一個人不領18%或是一個人不炒房價，就會改變整體環境嗎？
還不如改變【修改制度的人】，才能從根源改變一切。

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※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1488085640.A.00D.html
推 tz2733: 我作WB收到濃度太低的sample 會把sample通過濃縮管提高濃
→ tz2733: 度 給你參考
→ LIAR: 濃縮管要怎麼選？請問哪家有賣？
→ LIAR: 會不會反而卡在管上的反而多？
→ Ianthegood: google amicon
→ Ianthegood: mass不能整個sample送嗎
推 stampede1215: 濃縮管可以選 Millipore or Sartorius 的
推 stampede1215: 至於會不會吸附在膜上就要去要試用來試試了
推 tz2733: 濃縮管有依照目標蛋白的size(KDa)分 所以可能要先對你目
→ tz2733: 標蛋白size作了解 才不會收錯 至於會不會卡膜上 這我也不
→ tz2733: 清楚ㄟ...但好像有出很小體積的款式 降要卡住也卡少一點><
→ tz2733:   找樓上提的那幾家的業務來問問吧~~
→ LIAR: 請問ECM....選200kD以上合理嗎？
→ LIAR: 這邊貴儀有說不能整管送，如果我會操作或是我可以操作也許
→ LIAR: 就不會這麼燒腦筋了
推 abcam: 小量濃縮 有pall/millpore
推 tynse71864: 比較推 M牌
推 kaoru7568: pall有eppendorf大小的濃縮管，大一點就15mL tube