→ milkpa: 請先知道何謂正常。另，加入IPTG誘導外源基因表現一般來說 03/17 12:40
→ milkpa: 都會抑制host生長，所以前幾次都會做一管平行實驗，不加 03/17 12:41
→ milkpa: IPTG的看生長曲線做比較 03/17 12:42
→ a90648: 開到UV燈泡而不是可見光燈泡? 03/17 13:32
→ Ianthegood: induce後還會不會長因素極多 host strain, vector, pr 03/17 18:20
→ Ianthegood: otein size, toxicity等 03/17 18:20
→ Ianthegood: "uv儀器"是全世界都長一樣膩 03/17 18:21
推 Ianthegood: 有可能是你的protein很毒 express的時候死光了 induce 03/17 18:22
→ Ianthegood: 完再測吸光值看看 03/17 18:22
抱歉小弟儀器沒有講清楚，這次主要在於與先前成功實驗的比較，所以不確定所謂正常的菌量該如何
我們實驗室比較偏化學，這部分的實驗沒有在看生長曲線，都是直接試，跑膠看哪個條件好
然後小弟有比較IPTG對細菌生長的影響，沒加IPTG細菌的OD值會比有加的高，表示有加的長比較不好?
小弟可能會再搖一個大量LB culture，來比較有無抗生素的影響
→ blence: 從文章看起來就是只有抗生素與"UV儀器"是跟以前不一樣吧 03/18 03:27
→ blence: 既然如此,這次突然加抗生素的理由是? 03/18 03:28
老闆一直認為之前實驗條件得到的蛋白不夠濃不夠純，一直想改條件
討論後老闆認為大LB culture應該要加才對，先前的實驗是錯的，理由如qumai大所說
其實蠻合理的，但是菌真的變很少，所以現在要釐清到底是本來菌就不該長那麼多還是別的問題
推 tynse71864: 測的 OD值對嗎@@ 03/18 22:37
有找其他比較熟練的人去研究儀器，測量步驟沒錯，只是好像沒有甚麼標準品可以檢查儀器本身是否正常
推 qumai: 以前沒加抗生素可能plasmid都被踢掉了,菌不用做蛋白長得快 03/19 13:21
要做蛋白，大大說得很合理，也許其實本來就不該有這麼多菌?
小弟準備要純化長較少的菌跑膠看看
也許會比之前沒抗生素長較多菌的時候結果還要好
→ s992003: 為啥都會一直repeat Orz 03/20 12:20
→ blence: 不濃,跟蛋白特性大小有關,要試的應該是誘導溫度,時間,IPTG 03/20 13:00
→ blence: 等；不純,這一開始沒問,也不知有沒兩端tag純化或切膠處理 03/20 13:02
→ blence: 而抗生素,反正養菌就該加,不用試有無的差異了 03/20 13:02
→ blence: 另外,從10ml放大到1L續做4小時誘導再離心收菌,以早九晚五 03/20 13:06
→ blence: 的工作時間,OD是有可能被高估,但這只是推測 03/20 13:07
誘導條件之前有抓過，應該還可以
抱歉我一直把問題放在菌量異常，沒有提到後面的實驗問題，我們是用his-tag搭配NTA beads純化
另外我們是先把10mL放到1L放大，測OD是測1L那瓶的OD值，10mL的就是養16小時沒有測OD
→ Ice9: 一開始放到1L，是算OD值多少開始？養到OD 0.5–0.6 要多久？ 03/20 13:44
→ Ice9: 對了，你10ml菌是養在什麼容器內？ 03/20 13:48
10mL養在細長圓底瓶，沒有量OD，丟入1L裡面養到0.5-0.6大約3小時
※ 編輯: s992003 (140.128.123.73), 03/22/2017 11:45:05
推 star55555: 其實加抗生素菌體本來就會長得較差，而菌量少跟純化效 03/26 11:29
→ star55555: 果不好似乎沒有關係 03/26 11:29