[求救] 流式細胞儀如何做雙染positive control

[bill00202000 (handsome)]

各位高手好，

小弟最近要做乳酸菌包覆膠囊後，模擬人體胃酸測試再用流式細胞儀觀察存活情形，染劑
部分是fluorescein diacetate (FDA)和propidium iodide (PI)，
FDA是滲透型染劑，能滲透細胞膜(完整細胞膜)與esterase作用產生螢光物質，
PI是非滲透型染劑，當膜受損或細菌死亡才可穿過膜與DNA結合染色，
儀器是校內貴儀借用操作，管理人員要準備4種control，
分別是未染色(負控制)，兩種染劑的單染與雙染樣品(正控制組)，
小弟比較疑問是要如何做雙染的control，因為細菌未處理直接染色，其細胞膜是完整，
PI就無法染色，小弟自己想到的方式是先FDA染色後，加熱85度15分鐘殺死細菌再用PI染色?
但不知此做法是否會影響FDA的螢光物質，想請教各位高手此法是否可行或是有其他法可
以做的，因第1次碰流式細胞儀和螢光染色，這方面又無人可問
麻煩各位高手給予建議，謝謝

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→ lail: 以前細胞我是用酒精固定，不確定細菌行不行
推 jabari: 用酒精不就殺菌開洞了 囧a
推 Ianthegood: 他不是就要開洞嗎XD 只怕fluorescin染不上去
→ a90648: FDA先染之後 fix 後打洞染PI?
→ a90648: 我比較好奇為什麼要有"兩個相反意義"都可看到的正控制組?
推 lail: PI要染進去就是要在細胞膜上開洞啊...
控制組是管理人說要準備給他，我也不太清楚，我看paper大多是負控制組和單染正控組
所以做流式細胞也要酒精固定嗎？
※ 編輯: bill00202000 (39.12.225.84), 04/03/2017 13:33:46
※ 編輯: bill00202000 (39.12.225.84), 04/03/2017 13:34:26
→ a90648: 看情形，如果只是分析surface marker可以不固定
感謝各位的回答，小弟會再摸索看看，雖然還沒找出何適雙染的方法
※ 編輯: bill00202000 (39.12.106.214), 04/10/2017 01:03:24
→ a90648: 我覺得你再跟管理人員確認看看吧!! 雙染相反意義的正控組
→ a90648: 邏輯上很怪阿!! 都是相反意義了還要同時看到?