[求救] 請問有辦法可以知道某細胞有無表現某蛋白？

[MLSHBen (酷喔)]

如題

想請問是否有辦法可以知道某個細胞是否有表現某個蛋白

會問這個問題是因為我碰到下面所述的狀況

我目前遇到的情況是transfect某個X蛋白的WT及其mutant form(都帶有Flag-tag)到293T cell

用Western Blot壓Flag抗體得知都有transfection成功

又知道X蛋白會影響CaMKII及p-CaMKII的表現量

所以想用這同樣的lysate壓CaMKII及p-CaMKII的抗體看mutant form是否會影響他們的表現量

但好像壓不出來

查別的CaMKII的抗體的data sheet好像是293T mock transfection沒有CaMKII的band

(會查別的CaMKII的抗體的data sheet是因為原本的抗體的data sheet是用mouse brain lysate)

所以是否就表示293T cell不會表現CaMKII？

所以就想請問是否有辦法可以查到某個細胞是否有無表現某個蛋白

就我的情況而言就想知道293T cell是否會表現CaMKII及p-CaMKII？

謝謝！

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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 61.231.4.188
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※ 編輯: MLSHBen (61.231.4.188), 04/03/2017 02:25:46
※ 編輯: MLSHBen (61.231.4.188), 04/03/2017 02:26:38
→ xxtomnyxx: 拿 293T 的細胞做個 RT-PCR 看看？
→ blence: 一般sheet會用mock/transfect是要呈現Ab真的可以認抗原,而
→ blence: 不是未表現,明明視覺效果跟觀感不佳,但有廠牌偷懶就愛用
→ blence: 還有遇到mouse的圖時要先確認Ab辨識專一性,別家的難以參考
→ blence: 至於標題問題,以array或RNAseq解析數百細胞株expression
→ blence: profile的dataset我知道的至少三個,但293T似乎都沒被納入
→ tynse71864: 直接換個細胞呢? 如 HeLa或 COS7
想請問上面講的「明明視覺效果跟觀感不佳,但有廠牌偷懶就愛用」是甚麼意思？

查ATCC得知293T是human embryonic kidney來的，如果找embryonic kidney是否會表現是否就代表293T會表現？

謝謝！
※ 編輯: MLSHBen (140.112.122.57), 04/03/2017 11:09:14
推 egoweaver: RTPCR看transcription level有沒有還有WB跑個positive
→ egoweaver: ctrl吧，視情況而定293T不一定是你的實驗的良好平台
→ egoweaver: 是說你的抗體認得到human protein嗎，雖然CamKII人鼠應
→ egoweaver: 該有conserve啦…
感謝您的建議！
※ 編輯: MLSHBen (140.112.122.57), 04/03/2017 15:38:42
推 lelojack: 拿別人分析MASS的原始資料來看看
推 a34021501: 查DNA序列是否有排序過。