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如題 最近做計畫 設計primer 想找SNP的溫度 在操作的時候送來的primer有被摔到 想請問primer會斷掉嗎@@ 斷掉後會有什麼樣的結果? 今天跑完PCR後結果是大量的雜band 但是因為我們調的溫度也不是廠商推薦溫度 所以懷疑也可能只是溫度沒調對 或是說會是primer加太多嗎? 謝謝! -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 180.176.97.150 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1492603655.A.58C.html
blence: tube摔到不會讓prmer斷掉,就像溶水後vortex混合也不會碎掉 04/19 20:14
blence: 什麼叫做SNP的溫度 04/19 20:14
rt87687: 我們是測定特定基因的SNP最佳反應的溫度 04/19 20:18
rt87687: 所以是除非vortex太強烈 不然應該不會是斷掉導致雜band 04/19 20:19
rt87687: 嗎? 04/19 20:19
bob79620: primer多大?不過基本上primer很難斷裂吧 04/19 20:21
rt87687: 20mer 04/19 20:23
aaaazzzz: 雜band多跟PCR設定的條件有關,primer太高也有可能(可是 04/19 20:27
aaaazzzz: 沒有寫如何配,也沒人知道是不是真的primer加太多) 04/19 20:27
補上配置的材料 SNP:HER2 rs1058808 總共8個熱血 DNA 1ul Master Mix 10ul Primer F/R 1ul ddH2O 7ul Total 20ul 溫度條件(Gradient):52-60℃ ※ 編輯: rt87687 (180.176.97.150), 04/19/2017 20:31:02
a90648: 寫反映條件時重要的是最終濃度而不是加的體積 04/19 22:20
blence: 熱血?全血? 這樣還能要求很清晰無瑕的band嗎? 04/19 22:38
Ianthegood: sample量/內容沒寫 primer量沒寫 program沒寫 target 04/20 06:31
Ianthegood: size多大沒寫 哪個polymerase沒寫 是當板友都會通靈 04/20 06:31
Ianthegood: 逆 04/20 06:31
a10s07: 請樓下觀落陰去看一下 04/20 13:52
andy6001: 哦哦哦 我感應到了,他的primer告訴我他好痛XD 04/20 15:59
satantaco: 如果血液樣品沒經過前處理 直接做 雜訊很多很正常 04/21 11:29
des1005d: 觀落陰得知primer斷腿了 看到DNA就想黏 04/21 17:03
rt87687: Sorry沒有講清楚@@ 血液是已經處理完成DNA了 昨天重做後 04/22 00:20
rt87687: 現是primer加太多 04/22 00:21
rt87687: Primer確定沒有斷掉 謝謝版友回覆! 04/22 00:21