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LF2000新手 第一次用lipofectamin2000做transfect(以前用lentiviro system) 大概步驟看protocol都懂 我要轉染siRNA 也買了OPTI-MEM 我卡在siRNA+Opti-MEM以及LF2000+Opti-MEM mixture要加入細胞的地方有問題 q1:除了mixture之外 我的細胞培養液也是全部換成reduse serum Opti-MEM嗎? 還是原本細胞適用的McCoy5A培養液原液(不加fbs,ps) q2: trasfect 4-6h 要換compelet medium (就是看到這個步驟我才會想上一步驟transfect時是不是用McCoy5A原液) 所以我只有trasfect 6小時 然後其他42小時只是在等細胞複製這樣嗎? -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 163.25.92.164 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1493198960.A.B55.html
allthebest: 已找到高手解決:) 04/26 17:54
allthebest: 高手說q1用原液,q2可以拉長到12-16小時再換complete 04/26 17:58
allthebest: medium 有高手有其他建議也很歡迎喔 謝謝 04/26 17:58
e104582001: 其實都要再試試,不同細胞會有不同的效果 04/26 19:21
e104582001: 有些用Opt-MEM效果會比用 growth medium 效果好 04/26 19:22
e104582001: (C2C12就是這樣)沒有什麼步驟一定好,像我做是 04/26 19:22
e104582001: 18~24hr才換medium 04/26 19:22
e104582001: 所以最佳條件還是要看不同細胞株去 try 才會知道 04/26 19:23
xxtomnyxx: transfect 後要換 medium 主要是因為 lipo 有毒性,如 04/26 23:37
xxtomnyxx: 果你的細胞很耐都不會死,反而都不用換 transfect 的 04/26 23:37
xxtomnyxx: 效率還會高的多 04/26 23:37
xxtomnyxx: 所以就如 e 大說的,不同細胞株的狀況都不太一樣 04/26 23:38
allthebest: 了解 原來是因為lipo有毒性啊 感謝我會參考的 04/27 00:03