推 mosu0714: copy number從你用的plasmid去追查就知道了吧 05/01 20:40
原來copy number完全是跟基因有關 跟後面的事情無關!?
會不會我這個蛋白試了各種條件都沒起色就是因為用了濫vector QQ
→ milkpa: TM拿掉應該就是有機會soluble了吧，為啥還用C43？ 05/01 21:00
我們本來都這樣子想，但跑膠結果看起來還是一堆卡在膜上的樣子，不知道如何是好
※ 編輯: s992003 (123.205.17.239), 05/01/2017 21:46:07
→ Ianthegood: copy number跟plasmid的ori有關 05/02 01:07
→ Ianthegood: 你要做活性還要收inclusion body? refolding比擲杯還 05/02 01:08
→ Ianthegood: 難啊 05/02 01:08
→ icheee: 聽起來是本來想要透過測活性來看有沒有 inclusion body 05/02 05:35
→ icheee: 但是沒有測活性的 assay 所以想要用其他方式判斷是否產生 05/02 05:36
→ icheee: inclusion body? 05/02 05:36
我不想要inclusion body，但是不知道有沒有發生inclusion body
i大沒錯，我的想法是聽說inclusion body的蛋白通常不會具有活性，想看活性來判斷
現在跑膠來看感覺蛋白卡死在膜上，用detergent溶出的效果極差，但不確定是否產生inclusion body
我以為C43 plyss會有比較好的結果，比BL21貴兩倍說QQ
※ 編輯: s992003 (140.128.123.73), 05/02/2017 09:09:23
推 icheee: 測表達條件我會離心分 supernatant 跟 pellet 然後跑膠看 05/02 13:44
→ icheee: 看 induction 有沒有成功 並看是不是 soluble 05/02 13:46
→ icheee: （不過很久沒表達/純化蛋白了，有錯請大家指正>< ） 05/02 13:47
→ Ianthegood: 如果有閒錢的話 買一點bugbuster 看soluble/ib非常方 05/02 20:18
→ Ianthegood: 便 而且small scale可以用很久 05/02 20:18