[方法] tricine gel

[xy234786 (阿亮)]

我的實驗是想要跑出Trichomonas vaginalis中六個isoform 之rubrerythrin蛋白，大小
分別是21kDa,19kDa,22.1kDa,23kDa,22.2kDa ，老師說可以跑tricine-gel這種膠來分出
各個isoform， 請問大家有跑過這種要分出分子量相近的實驗嗎？，想要清楚配方以及要
注意的細節

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推 july81212: 只有1D可能分不太出來吧  連SEC都會overlapping 的大
→ july81212: 小 不考慮2D嗎
推 july81212: 15%膠 60V慢慢跑試看看 之前是分15-19kDa 4個isoform
→ Ianthegood: sec本來解析度就不是太高啊 可能要跑capillary?
推 tynse71864: 我的蛋白(~16-19kda)有4個isoform, 在 sds page跟 tri
→ tynse71864: cine gel結果都分的出來;同1F跑15%gel    跑膠速度正
→ tynse71864: 常
→ xy234786: 感謝大家 我試試看
→ xy234786: http://i.imgur.com/IWMfFxT.jpg
→ xy234786: 請問一下 為什麼感覺兩個sample跑的速度不一樣 然後到
→ xy234786:  下半部的時候 marker的band也變的有點歪斜 我這個膠是
→ xy234786: 不是一層8% 第二層10% 第三層16.5%的tricine gel跑的(
→ xy234786: 老師要我這樣做)
推 tynse71864: 三層應該不是問題 ; 我記得 tricine gel的sanple體積
→ tynse71864: 不能太大 (一般建議10以下)
→ tynse71864: 下方 Mr歪代表你旁邊 land該處蛋白太多了   擠到隔壁
→ tynse71864: 的跑道
→ xy234786: 我為了避免互相擠壓 分開load了，但跑出的結果還是分不
→ xy234786: 我為了避免互相擠壓 分開load了，但跑出的結果還是分不
→ xy234786: 開也，頂多就只有一條band，老師說他以前做實驗連50Da
→ xy234786: 都分的開，我怎麼分不開@@
→ xy234786: 老師是跟我說第一層跑10mA,第二層15mA,第三層25mA，這
→ xy234786: 樣條件正確嗎？
→ xy234786: 樓上t大你當初是怎麼跑的呢？，可以跟你要詳細protocol
→ xy234786: 嗎？膠配方...http://i.imgur.com/xFTZlSX.jpg電壓電流
→ xy234786: 時間...  緩衝液配方等等另外老闆一直說要用Horfer SE28
→ xy234786: 0電泳設備跑才分的開 你也是用這設備跑的嗎？ 快畢不了
→ xy234786: 業了 希望趕快跑出來