[求救] 脂肪酸如何溶解在培養液???

[saphina5545 (sammilololo)]

大家好, 目前我正在做細胞實驗

實驗的內容是要用"加了脂肪酸的培養液"養細胞

我們所用的脂肪酸有oleic acid(OA)和palmitic acid(PA)

OA的部分還好,在medium的溶解度ok

問題是在palmitic acid

我們是先用與PA相同濃度的NaOH當作solvent來溶解PA

在這個步驟PA都能夠完全溶解在內

而因為是要餵細胞吃,所以在配置成working solution之前

要先把PA和 BSA conjugate在一起,以模擬在生物體內uptake脂肪酸的形情

但問題來了

這個BSA一開始也是要溶在medium裡面

而PA一旦碰到medium就立馬析出

怎麼弄都弄不散也溶不了

我也找了很多的reference

有人說可以用DMSO

但是我的實驗剛好不能用DMSO......

然後因為我已經盡力去溶解它了 medium還是呈現混濁狀

我不知道他的極限是不是就只能這樣了??

因此想請問板上的各位

你們有遇過類似的實驗嗎????你們都是怎麼解決的呢????

真的很想趕快解決這個問題啊~~~~不然細胞都不能養TT

謝謝各位~~~



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推 joseph103331: 不能用DMSO的原因是什麼呢?
→ saphina5545: 因為我的實驗室要看發炎激素的變化
→ saphina5545: 之前有聽學長說DMSO會抗發炎(?) 不曉得有沒有聽錯
→ saphina5545: 所以擔心會影響我的實驗結果
→ saphina5545: 還是其實影響沒那麼大呢
推 yuasa: PA的最終濃度多高是重點。會在media裡析出的話，0.1%的dmso
→ yuasa: 其實也沒有任何幫助。我的經驗是你要讓PA跟BSA慢慢地conju-
→ yuasa: gate，最好能放在55度的水浴兩小時(in NaOH solution)。但
→ yuasa: 然後跟media混合時，要慢慢一滴滴地滴下去同時搖晃混勻。即
→ yuasa: 使如此，因為PA水溶性真的不好，不太可能用到高於1 mM的濃
→ saphina5545: 我conjugate時的PA濃度是2mM 所以是要先降低PA的初始
→ saphina5545: 濃度嗎? 我最終要使用的濃度是500uM就好 所以是一開
推 yuasa: conjugate時的濃度可以更高，因為是在鹼性溶液裡，溫度夠高
→ yuasa: 的話其實溶得很好，500 uM的話我覺得要做到澄清(只有一點點
→ yuasa: 濁)是完全可以的。BTW你BSA最終濃度是1%嗎?
→ saphina5545: 了解!謝謝你 那請問最後的working solution
→ saphina5545: 我BSA和 PA的濃度是1:6
→ saphina5545: 是需要最後把BSA調到1%嗎?
→ saphina5545: 不好意思 可能回的慢 我還不太會用ptt的介面QQ
→ saphina5545: imgur.com/b4GfTe7
→ saphina5545: http://i.imgur.com/b4GfTe7.png
→ saphina5545: 圖片上的已經是woring solution了 這樣算清澈嗎?
→ yuasa: 看起來可以再澄清一點，我有寄站內信給你了
→ saphina5545: 我回信了唷~ 謝謝你!!
推 tynse71864: 曾經遇過一樣的問題 XD
→ tynse71864: 最後是把 FBS拿掉就解決了