作者nnn79 (大頭)
看板Biotech
標題[求救] 石蠟切片脫蠟後掉片很嚴重
時間Tue Jun 27 13:25:02 2017
大家好
第一次發文
排版不好請見諒~
我是用小鼠大腦的石蠟切片
要做IHC
切完片tissue的形狀還很正常
但是在 Xylene => 酒精 的脫蠟後就脫片非常嚴重
好一點這樣
http://imgur.com/hJpkVOH
慘一點就會這樣
http://imgur.com/a/jirM6
就算沒有脫也會有點裂
用了很多方法都沒辦法解決
請大家幫幫忙~
Condition：
sample：4%甲醛灌流後，泡在甲醛中overnight，送學校的組織中心脫水和包埋
切片前將石蠟放在冰上約30min
切片厚度：5um
玻片:matsunami frontier FRC-11 (網站上說coating MAS)
展片：約45度的自來水
烘片：放在烘片機上overnight (約45度)
~
脫蠟：
烤片：65度,10min(也有過65度,1hr,但沒差很多)
Xylene(2*10min) => 100%酒精(2*2min)
=> 90%酒精 => 80%酒精 => 70%酒精(各2min) => PBS(3*2min)
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推 Bows: 我這樣不會掉片，反而是煮的時候會皺掉，看起來是片子的問題06/27 13:49
所以是技術的問題囉 QQ
→ schmitt: 用有coating的玻片06/27 13:55
→ schmitt: 烘完要看還有沒有水在中間,撈切片的時候要注意06/27 13:57
→ schmitt: 再去跟玻片廠商確認有沒有送錯玻片(以前發生過)06/27 15:17
感謝～我問看看
→ REIDO: 我有時煮沸的水泡會打掉組織06/27 19:01
我還沒到煮沸就掉片了 QQ
推 santimental: 可以考慮烤片O/N看看06/28 15:40
65度O/N嗎？
→ aj1139: 好奇問，以腦這種脂質含量高的組織來說，會不會選用06/28 20:44
→ aj1139: APS coating的玻片黏附性會比較高呢？ 06/28 20:45
好像有聽說APS和PLL比較適合？
但我們家還有好多MAS的 QQ
※ 編輯: nnn79 (223.138.98.28), 06/29/2017 10:40:54
→ sdshow: 玻片的效期也要留意，過期了COATING效過變差 06/29 12:05
推 yfw: 單看玻片上最右邊的組織 感覺脫水沒做好.. 08/07 13:16