[求救] 請問collagen的western用UREA會比較好嗎？

[REIDO (NEET)]

我用一般的RIPA跑collagen，雖然也能跑，但效果不好，要loading很多，RIPA廠商給的配方如下。
0.5M Tris-HCl, pH 7.4, 1.5M NaCl, 2.5% deoxycholic acid, 10% NP-40, 10mM EDTA

後來我用UREA，GAPDH差不多，但UREA的collagen明顯多很多，但是用UREA問題是離心後很容易有鼻涕，
BCA定量也要注意干擾。加上我也要跑其他蛋白，有些protocol有提到用酸溶的不曉得會不會影響其他
蛋白。

請問一般如果同時要跑collagen和其他蛋白的western，有特別建議用UREA或甚麼成分的lysis buffer嗎?
如果真的要用UREA，那個鼻涕是染色體嗎 ？要如何去除那個黏黏的鼻涕狀沉澱？

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當你選了一間新餐廳，發現沒想像中的好吃的時候，你下次願意去吃另一間食安有問題的，
                                                當作給新餐廳老闆的一點抗議嗎？
當你發現新買的飲料不好喝，你下次願意去喝化糞池的水，當作表示對飲料商的不滿嗎？
當你宿舍舍友管機歪又囉嗦，你願意搬去和強暴犯住一起，表達對原本舍友的不滿嗎？
當你發現小孩還不會講話，只會哭很煩，你會選擇把這個小孩丟到孤兒院，再生一個看會不會安靜點嗎？

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→ Ianthegood: benzonase
→ REIDO: 在UREA內不會死掉嗎？
→ REIDO: enzyme不會被UREA或 detergent給破壞嗎？還是要哪時候加？
推 joseph103331: 你可以細胞多收一點,取一部分出來用Urea粹,其他用
→ joseph103331: 平時的方法即可
→ williamyang: 可以用sonicator來破壞DNA
→ REIDO: 有人知道臺大醫院有哪個共研有sonicator嗎？
推 tynse71864: 6共試試？
→ storm780121: 加loading dye後煮久一點再離心看看
→ REIDO: 疏水性蛋白有些不是不建議煮嗎？collagen有沒有這種限制？
→ REIDO: @tynse71864:感謝，我明天去問