[求救] 跑10kD以下的蛋白，推薦何種SDS-PAGE

[VincentYan (VincentYan)]

請問版上的各位大大

小弟我有一個蛋白(peptide)的分子量約5-10 kD之間，嘗試很多種Tris-glycine gel，E.
g. 自製的16%或預鑄8-16% gradient gel (GE的，但已停產)，但都一直跑不出來，dye f
ront始終停在10 kD就不能再跑下去了(有用小分子量的protein marker，<10 kD marker
跑得出來)，後來發現原因可能是膠的分離範圍在10kD已是極限了(推測)

最近想改試Invitrogen NuPAGE 4-12%，搭配MES buffer，根據官網(https://goo.gl/uRa
BjV)表示: 分離範圍最小可到3.5 kD

不曉得有沒有版友試過此預鑄膠，可以分享意見，或是推薦跑10 kD以下蛋白的方法

感恩不盡><

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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 140.112.4.190
※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1500879586.A.CEF.html
→ VincentYan: 上述文章提到的網址https://goo.gl/uRaBjV
推 Ianthegood: 分子量小就不要跑gradient阿 precast 12%跑15kda很ok
會跑gradient是因為同時還有其他>50 kD蛋白被表現; 跑15 kD ok, 但我要看的是10以下的啊
※ 編輯: VincentYan (140.112.4.208), 07/24/2017 15:58:51
→ aj1139: 自己配18%的啊
→ Ianthegood: 12%可以分10kda以下沒問題啦 如果你50k以上也需要trso
→ Ianthegood: lution就跑兩張唄
推 tynse71864: 16% dye front會卡在10k嗎  (思
→ tynse71864: 10以下真有必要可以跑 tricine gel
推 alaric: 有用錯dye?
→ shmin: Tris-Tricine http://www.hixonparvo.info/SDS4Peptide.pdf
推 yfw: 13.5 or 15% 另外要考量sample種類與抗體品牌濃度
推 yfw: 還有 要看的蛋白是在核質膜？這也可能是跑不出來的原因
→ yfw: 不一定是膠的%數問題