[求救] Mycoplasma 和 Black Dot 細胞汙染差異

[a0976134 (帶螞蟻散步)]

先前進行細胞株培養時 有曾經用過Hygromycin篩選細胞

之後以 Complete medium with 10% FBS and 1% P/S 培養

但最近該細胞株卻有汙染的情況發生

但症狀與Black Dot 和 Mycoplasma 汙染的情況很像

我個人判斷依據是：

Black Dot : 存在於胎牛血清內之物質 高等規格級別之胎牛血清不常見

            在高倍率下能以肉眼看到在細胞間有小黑點在點與點之間移動

　　　　　　而並非只是原地打轉（有可能是細胞碎片或是雜質)



Mycoplasma : 症狀輕微時肉眼無法辨別 但嚴重時細胞間有黑色顆粒分佈

             細胞培養液底部會有沙狀物質出現 但培養液不變色

兩者汙染嚴重時 都會影響到細胞生理現象

但若是現象輕微時 也能透過每天勤換medium

和多次DPBS清洗的步驟改善此現象

想請問兩者的依據是否是靠此判斷 ?

======

已知目前市面上已經有販售Mycoplasma Removal Agent的產品

大概處理時間需要2週 是否處理完後 此細胞就可以進行細胞實驗 ?

至於Black Dot 由於目前似乎都是建議靠多種高濃度抗生素篩選

也有人建議說 遇到此類型汙染就直接丟掉

想請問各位有在做細胞操作的人 大多都是怎麼去處理的?

先感謝各位前輩告知

--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 180.217.190.147
※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1501828647.A.34B.html
※ 編輯: a0976134 (180.217.190.147), 08/04/2017 14:40:54
→ honey823: (1) mycoplasma應該無法用一般顯微鏡看到 (2) 丟掉吧
→ a0976134: mycoplasma 輕微看不出來 但嚴重時培養基底部有沙狀物質
※ 編輯: a0976134 (180.217.190.147), 08/04/2017 15:47:58
推 pichia: PCR 或是dapi染看看，這樣猜也太不科學了
推 liumang: 我們實驗室的學長姐說  他們經驗上很難清除
→ liumang: 我指的是Mycoplasma 當下殺完後用KIT測是沒有了  但過陣
→ liumang: 子又會出現  當然不能排除是其他地方污染  導致重複感染
推 hsnuyr: 用過殺mycoplasma的藥但是移除後約一週又會測到  問過原廠
→ hsnuyr: 表示那是正常的 原廠建議養在low dose的藥物內或是定期清
→ hsnuyr: 除  所以後來買的到的細胞我都直接丟了 除非stable clone
→ hsnuyr: 才建議用藥定期處理 嚴重的mycoplasma汙染沙沙的比較像cel
→ hsnuyr: l debris 至於藥處理完能不能做實驗我覺得要看實驗而定
推 yfw: 經驗談基本上這類中獎 就要丟了 沒可能殺乾淨的
推 HaGa5566: 之後培養可試試看Invivogen的Normocin，搭配PS效果應該
→ HaGa5566: 不錯