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如題,我是用波牌 100bp DNA marker跟6X loading buffer,比例sample5:buffer 1,但照膠時marker沒出來就更別說有其他band了,UV照膠也都有設定,而且已經試兩次 都ㄧ樣,這是發生什麼事嘛? 再者pcr機器會有可能影響批不出東西的原因嗎? -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 114.34.144.193 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1501849392.A.5BF.html
blence: PCR機器當然不會影響UV照膠時marker沒出來 08/04 21:42
dasiy3112001: 我是想問機器是否會影響無產物的情況呢?不好意思沒 08/04 21:46
dasiy3112001: 講仔細。 08/04 21:46
asdfgpooh: 配膠有加dye嗎? 08/04 22:14
e104582001: 一班來說沒有MARKER99%是膠沒做好,EtBr OR DNA染劑 08/04 22:16
e104582001: 有加? 08/04 22:17
xxtomnyxx: 先猜沒加染劑 08/05 00:47
Ianthegood: 電極插反 旁邊load個1kb的看看 08/05 02:49
Ianthegood: PCR批不出來的原因太多太多了 膠照不出來的倒是沒幾 08/05 02:51
Ianthegood: 個 08/05 02:51
susu8n0: 我猜膠是用水配的 08/05 17:26
dasiy3112001: 但是都不是耶!電極也很肯定沒插反,也有加dye!膠 08/05 19:00
dasiy3112001: 也是用TBE配的,我用這組marker跟loading dye已經跑 08/05 19:00
dasiy3112001: 第二次都是ㄧ樣空無ㄧ物了…… 08/05 19:00
dasiy3112001: 而且我是內染的 08/05 19:10
Ianthegood: 確定電源供應器有啟動?如果是EtBr內染你照膠的時候 08/05 20:16
Ianthegood: 膠下面1/3左右應該會有一條界線 有嗎? 08/05 20:16
hsnuyr: dye有跑出來嗎?有的話內染的EtBr或是DNA染劑微波完有等 08/06 00:52
hsnuyr: 膠稍微冷才加嗎?我遇到通常都是太急著加但是溫度還太高 08/06 00:52
hsnuyr: 所以degrade 08/06 00:52
joseph103331: 內染不行就改一下外染 然後跑個plasmid當control 08/06 03:10
susu8n0: 跟其他實驗室借已包含loading buffer的marker 08/06 14:47
sunorange: 給個照片 ,比較好討論 08/06 20:25
yfw: 建議補個圖片比較容易判斷 一般marker沒出來90%是膠沒做好 08/07 12:58
dasiy3112001: 謝謝大家,我已知道原因了,但都不是大家猜想的哦! 08/07 19:20
leptoneta: 那請問是什麼因素呢? 08/07 20:43
kuyar: UV波長不一樣嗎? 08/07 23:40
Misher: 我猜沒開UV光 XDDD 08/08 09:43
dasiy3112001: 是我們家不用etbr染計,而是用無毒染計可兼loading 08/08 19:27
dasiy3112001: dye用,但新買marker附的dye要外染,所以我很順手 08/08 19:27
dasiy3112001: 的拿來用了,結果就GG 08/08 19:27
dasiy3112001: 發現劑打錯,歹勢 08/08 19:28
turtle24: 意思是原本的無毒染劑染不到新買的marker? 要專用的? 08/09 00:51
Ianthegood: 他marker裡面已經有dye了就沒另外再加內染的loading b 08/09 00:59
Ianthegood: uffer 08/09 00:59
Ianthegood: PCR又剛好沒跑出東西 08/09 01:00