[方法] drug-resistant cell line

[GanLinBa (Fait votre père)]

我們實驗室有篩選出來的gemcitabine-resistant cell line

我想問 在maintain cell line 時我們會加drug

1.
但如果要單純比較parental vs gemcitabine-resistant cell line在不同環境

例如starvation vs hypoxia vs FBS的某個protein表現

做實驗有需要加gemcitabine嗎?

老闆說因為這個是篩選出來的

所以就像stable cell line 做實驗不需要加gemcitabine

2.在gemcitabine-resistant cell line 想看某個gene是不是對於resistance很重要

所以我就利用gemcitabine-resistant cell line去用virus knock down實驗後

加puromycin去篩選 請問這時需要也加gemcitabine一起去篩選嗎?

如果puromycin+gemcitabine 可是這樣篩會不會導致引起其他gene誘發resistance?

感謝


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推 joseph103331: 1.我覺得要加,不過安心起見要加不加可以一起比較
→ joseph103331: 你不知道加了會不會有影響,可是突然不加也是一樣
→ joseph103331: 多一組平行比較一下看看
→ joseph103331: 2. 都要加,就是抗雙藥物而已,篩藥本就有可能篩到抗
→ joseph103331: 藥的細胞,用single cell比較沒這個問題,不過也會被
→ joseph103331: 質疑嵌入的序列,所以要多挑幾顆
→ GanLinBa: 感謝
推 jabari: 反正是cell line..這次不作, 以後reviewer也會問
→ blence: 用puro篩出活下來的細胞,會是puro sensitive嗎？
→ blence: 同樣的,KD的時候加gem,可以篩出gem-resistant gene KD？
→ Ianthegood: 你一開始這個cell line是transient還是stable clone?
→ GanLinBa: resistant cell line 是篩出來的
→ schmitt: "stable cell line 做實驗不需要加gemcitabine"??是嗎???
→ schmitt: 為什麼我學到的要加
→ GanLinBa: maintain會 但如果要做gemcitabine的影響會加
→ GanLinBa: 但如果我想看microenviroment對resistant cell line
→ GanLinBa: 就不會