[求救] 細胞汙染解決

[andy44 (BIRD <(O)3)]

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目前實驗室的細胞實驗

斷斷續續污染了快兩三個月

雖然前一陣子有比較緩解

但最近又開始有災情出現

先說汙染類型

用肉眼看明顯可以看到 medium變成粉紅色

然後裡面有白色的沙沙狀的東西

如果用高倍顯微鏡(x40)可以看到小小的黑點點在動

之前實驗室已經有用過的解決方法

1.laminar flow裡面所有的東西都用酒精跟抗菌劑擦過然後照UV(hipa半年前才換過)

2.incubator也全部用酒精跟抗菌劑擦拭在照UV,並且把hipa換掉

---------猜測------------

之前查到有些人說這種汙染是在小牛血清裡面可能會有的東西

不過我們的血清是跟GIBCO購買的高級血清照理來講應該不會出問題

另外PBS因為都是在配完滅菌後就會把它放到laminar flow裡面照UV然後再使用

而且也會先檢查有沒有懸浮物才會使用

TE都是跟廠商買來自行加入滅過菌的PBS所以機會不高

其實常常困擾的問題是同一批分的細胞

有一盤有另一盤卻沒有orz

我自己認為的部分可能是

1.滅菌鍋爐的效益變差,因此可能血清瓶滅菌不完全

不知道現在有哪些方法可以測試滅菌爐的效果??

2.在laminar flow同一間房間有養幾隻實驗鼠

不知道會不會是跟這些老鼠有關?


寫了好多感謝耐心看完的大大



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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 140.114.100.192
※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1502619118.A.B17.html
→ lail: 每個人操作都會嗎?
每個人都有,只是沒遇過同一天一起爆發的,通常都是今天是A明天是B
推 weico: 滅菌釜可以跟廠商或醫材行買滅菌指示劑；還有我一直很懷疑
→ weico: 把器具曬在操作台的UV真的有很好的殺菌效果嗎，畢竟照射死
→ weico: 角很多
大大是說滅菌膠帶嗎??就是如果滅菌時有達到標準就會有黑色痕跡出現那個??
推 leptoneta: 實驗鼠......
※ 編輯: andy44 (140.114.100.192), 08/13/2017 21:17:31
推 quitman: 滅菌指示劑好像是指一種桿菌的芽孢 市面上好像有賣~
恩恩了解我會去問問
推 elelith: Water bath 有清嗎
water bath 其實滿髒的所以後來都沒人warmXDD
推 datro: 感覺是黴菌/酵母菌類 但是 通常動物不會跟細胞放一起
OK了解
推 joseph103331: 滅菌膠帶不是正式的指示標的，不要相信
→ joseph103331: 材料懷疑的話拿去培養測看看就對了，不過大多數時
→ joseph103331: 候都是操作的問題比較多
測污染這件事我們都會做
之前是發生剛配完的medium
就會有污染
所以要用前都會測過
不過最近是
一開始沒汙染
可是用了一兩個禮拜
就有汙染產生...
染後側medium裡面就有汙染了...
操作問題好像真的無解
不然就是每個人在操作的時候旁邊都要有人在盯可能會出錯的地方
感覺就像全部打掉重練
推 LIAR: 黴菌/酵母菌很大顆應該很好認吧？小黑點我還是懷疑細菌。
→ LIAR: 之前實驗室鬼打牆，我最後直接去別的實驗室幹一整套的耗材，
→ LIAR: 從medium到pipet到dish，全都用別人的，慢慢抓原因。
恩亨了解,跟別的實驗室借器材來用好像還沒試過
感謝大大的建議
推 zeroking0519: pipet是不是很久沒有拆開來清洗消毒？  然後是不是
→ zeroking0519: 很多時候會不小心沖上去？
pipet好像真的重來沒有清過LOL
再看看要怎麼清
感謝大大建議
推 MDCCLXXVI: 液體滅菌有拉長時間嗎？ 1L要滅45分鐘
這我可能要問問學長
不過我自己滅都是40分鐘,那我之後再拉長好了
推 untilnow: 放個6well 放medium 其中一格滴幾滴滅菌pbs
→ untilnow: 或其他懷疑汙染液體
推 vLkdSc: 有圖片嗎？
http://imgur.com/8dgJ5wv
http://imgur.com/my65KST
照片超不清楚sorry但是可以看出最上面那盤明顯跟下面的顏色差別
在視野下就是有非常小非常小的黑色點點在游動
推 aj1139: 遇過跟你一模一樣的情況，後來發現實驗室隊友很雷，他一做
→ aj1139: 實驗就大污染。每次有污染我都拿Lysol把所有可能的地方擦
→ aj1139: 過一遍，能夠滅的就拿去滅。如果你懷疑medium或FBS，直接
→ aj1139: 分裝一些放在桌上，變混濁就中獎了。
這種情況真尷尬
我也會懷疑某些同實驗室很雷的人
可是也沒辦法叫他不要做實驗
逼他自己用自己的incubator跟laminar flow....
※ 編輯: andy44 (140.114.100.192), 08/18/2017 11:31:33
推 joseph103331: 打掉重練不會比較慢喔,大家有共識的話互相監督很好
→ joseph103331: 雷人就是欠電,請學長去電,然後盯著他做實驗
→ joseph103331: 多找一些人花點時間培訓實驗室人員技術可省不少時間
→ joseph103331: medium有汙染幾乎就是操作有問題了XD
→ travelmat: 滅菌膠帶應該只是，滅菌指示的一種，可以買高級一點的
→ travelmat: 測試，GMP廠都會用那個做驗證
→ Eyer: 生物指示劑，裡面是嗜熱芽孢桿菌之類的孢子；請廠商提供適
→ Eyer: 用濕熱或乾熱滅菌的指示劑。
推 ksksks: 操作台的uv很弱而且穿透力差...
推 grayqueen: 目前市面有檢測滅菌釜功效性的QC實驗唷！可以去買來試
→ grayqueen: 試。