[求救] 24well 細胞越種越少

[es77823 (77823)]

想請教版上各位學長姐們

我是實驗室新手
每次種24well 時細胞都會越種越少

步驟如下：
1.將細胞用trypsin，離心再加入1cc medium，後去數細胞

2.種在24well，每1well 30000顆細胞

3.會把算好的細胞數加到內含25cc medium的tube

4.1 well加1cc

我試過用auto pipet 跟 pipet，但每次種24 well完後做mtt時，最後幾格(大約8格左右)的well讀出來的od值都會下降很多

連control 那格都下降很多，所以排除是加藥的問題

想知道這個問題該如何解決，謝謝!!!




--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 114.41.127.44
※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1504626624.A.B38.html
→ e104582001: 細胞沉澱很快，每次在加都要混勻，不然會越加濃度越低
→ es77823: 我每次吸6cc，都會用auto pipet再pipetting，然後再吸6cc
→ blence: 我會猜是你藥物處理有換到medium,較後面處理的細胞乾死掉
→ blence: 如果是分的數量差異,MTT之前就看出來了,不必測OD才發現
→ blence: 另外24well用到0.5ml就好,液面太高,對生長也沒好處
→ es77823: !!!!原來是這樣，會再修正我的做法的，感謝B大的幫忙
推 aj1139: 綜合上面的建議加一點我的做法：細胞混好在tube之後，每
→ aj1139: 加完一盤整個tube搖一下混勻，然後再加下一盤，前提是單
→ aj1139: 手開關蓋要練好、tube要絕對乾淨
→ aj1139: 方便說是什麼細胞嗎？
→ es77823: 因為在練習階段，所以都是學長姐們的細胞，種過3種不同的
→ es77823: 細胞，但結果都是細胞數越來越少
推 joseph103331: 種細胞後 做實驗前 都養成看顯微鏡的習慣比較好
→ joseph103331: 24 well應該還可以透過日光燈看細胞密度 不過前提
→ joseph103331: 種得要夠勻
→ aj1139: 做完都會看顯微鏡檢查 +1
→ tynse71864: 而且24很難搖勻哈哈
→ es77823: 嗯嗯會再試試看的!!!!謝謝各位幫忙
→ LIAR: 24well我都用1ml耶？一方面避免蒸散的影響，也避免phase
→ LIAR: contract中間旁邊差異太大。