看板 Biotech 關於我們 聯絡資訊
https://i.imgur.com/XxZYzHY.jpg 這是我western圖,不知道為何有些band會歪掉,不是一條直線,是跟跑膠時的電壓有關 嗎?我是上膠60V,下膠100V在跑,transfer200V一個小時。 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 101.8.211.89 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1505368782.A.2D0.html
bj59420: 跑的時候裡面可能有漏buffer? 09/15 12:17
rbcajyh: 左右是不是有空一格well沒有load東西?這樣很容易沒有平 09/15 15:51
rbcajyh: 衡band歪掉 09/15 15:51
xy234786: 不過我有八個sample加marker,用大的齒梳,會無法避免 09/15 21:45
xy234786: 用到旁邊的well 09/15 21:45
iyorain: 下面膠感覺融了 transfer100v80分鐘試試 09/15 23:16
twnndnpdnc: 冰寶有換嗎? 09/16 23:12
xy234786: 我沒試過100V 80min transfer效果好嗎? 會不會tran不過 09/17 23:41
xy234786: 去 09/17 23:41
xy234786: lab的冰寶是都沒有換 因為也沒其他的qq 每次tran完是都 09/17 23:43
xy234786: 滿燙的 所以主因可能就是過熱嗎? 我是都埋在冰裡tran.. 09/17 23:43
xy234786: . 09/17 23:43
joseph103331: 這麼小不會過不去的,我們都用94V而已,100kDa也是 09/18 03:08
joseph103331: 1h就過(10% gel),高趴數的膠要久一點。 09/18 03:08
xy234786: 我的是18%膠 建議用多久呢 09/18 22:00
aj1139: sample夠用的話,而你又想跑漂亮,給你一些自己troublesh 09/19 07:28
aj1139: oot的方法。同時跑兩片膠,跑完之後看ladder有沒有跑好看 09/19 07:28
aj1139: ,選一片好的做WB,另一片染CBR相互對照。有懷疑步驟中的 09/19 07:28
aj1139: 細節就一次改一個條件去抓。另外,transfer buffer不要。 09/19 07:28
aj1139: reuse,不然只會越跑越慢、越跑越燙。 09/19 07:28
aj1139: 順帶一提,你transfer的電壓不太可能上得去200V,如果硬 09/19 07:30
aj1139: 催上去,膠應該也融化了吧 09/19 07:30
westernblot5: 溫度太高也有可能 我們會埋在冰裡面再拿去4度冰箱 09/05 22:35
westernblot5: 裡面跑 我們機器統一是在4度裡面 09/05 22:35