[求救] 細胞莫名死亡(污染？)

[icloudy (icloudy)]

如題
上個月新養了某細胞
野生種加上基因knock out總共三種

奇怪的是，
學長姐分給我一盤細胞後
我第一次culture完，細胞生長正常
但第二次culture後，細胞會浮起死亡
（很多次了，都是我culture第二次後就死掉）


給老師看過後還是找不出原因
因為
1.medium沒有混濁
2.拿到高倍顯微鏡下看也沒有細菌等等微生物的蹤跡
3.會發生同時間culture的另一種type生長的很好但另一種死光光的情形
4.同實驗室的人細胞都沒有污染，排除是器材問題

這種情況第一次發生後
就換了medium、PBS、trypsin
但還是繼續發生...

想問版友有人發生過這種情況嗎？
或是有什麼好建議呢...







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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 1.171.45.119
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※ 編輯: icloudy (1.171.45.119), 09/23/2017 00:59:08
→ blence: 是只有ko line沒事,parental死掉吧?
都會死掉QQ但有其中一個ko沒那麼容易死
※ 編輯: icloudy (1.171.45.119), 09/23/2017 01:06:31
→ blence: 那需要去查查medium被額外添加什麼了
謝謝B大回文(感激)學長姐用同配方medium養同樣細胞，雖然細胞會慢慢變得不健康,但還
是能活很久，沒有像我一樣很快死掉唉
※ 編輯: icloudy (1.171.45.119), 09/23/2017 01:23:49
→ williamyang: medium是用那個牌子和批號,可以幫你看看
→ Ice9: 縮短個人操作時間，以及儘量緩和操作手法呢？看看會不會改善
→ blence: 從描述用詞及不熟悉培養的狀況,很像是抗生素造成的
→ akira0956: 會不會是在trypsin處理時操作太久，前面幾盤接觸trypsi
→ akira0956: n太久
→ akira0956: 不過第一次culture沒事...
→ cyh1220: 細胞的代數幾代了啊？會不會是太老?或是你的滿度太滿?