[求救] Pichia 的培養基混濁

[jazzinfuture (CoM)]

第一次發問 請各位鞭

現在正在使用甘油代謝路徑的噬甲醇酵母菌做蛋白質培養

培養基是BYPG / BMG

分別材料是
BYPG
yeast ex     5g

pepton  10g

glycerol 10ml

phosphate buffer ph6.0   50ml

誘導培養基

10x YNB(YNB + ammonia sulfate)

phosphate buffer ph6.0  50ml

500x biotin 1ml

10ml. glycerol
甘油都是分開滅 biotin等冷了加

但是不知道是什麼樣的問題 冷卻之後都會沉澱東西出來 上顯微鏡看起來不像菌

起初以為是甘油高溫滅菌有問題 就用.22 過濾  還是會有沉澱析出

以前都誘導的出東西  現在都誘導不出來

請大神開示m(_   _)m

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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 180.217.134.31
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※ 編輯: jazzinfuture (180.217.134.31), 09/23/2017 01:20:53
→ silverberry: YNB 也是用滅的嗎? 是加在其他成分裡滅的嗎?
→ silverberry: "以前都誘導的出東西" -> 和現在是做不同的蛋白質嗎?
表現的蛋白質都不變

YNB 1.7g + ammonium sulfate 5g 和 phosphate buffer 丟一起滅菌 甘油另外跟水混合滅
菌  冷卻之後倒一起混合這樣
→ silverberry: 那兇手應該是 YNB
→ silverberry: 所以誘導的時候培養基就沒有 yeast extract 了?
→ silverberry: 也沒有 peptone 了?
→ jazzinfuture: 對
→ jazzinfuture: 所以... ynb壞了?
→ silverberry: 之前的經驗是也不是不能用，不過從很營養的培養基
→ silverberry: 換成很不營養的培養基誘導，有什麼特殊原因嗎?
→ silverberry: 這樣菌長的還好嗎?
啊哈哈  推文追蹤沒追到大大回覆

因為前人是遵照expression kit 的說明在走 後面條件也都有找好
是怕菌的代謝路徑走到glucogenpath 就不能行誘導(說明書有原因)
去年學長在誘導的時候都有誘導出來
今年初我做兩輪都有東西  不過活性慢慢的減少 就覺得大事不妙然後開始除錯
菌長不長的好應該不是問題

因為要誘導的條件OD600>=60



※ 編輯: jazzinfuture (180.217.170.154), 10/10/2017 02:46:34