→ turtle24: 舊的gDNA有試過嗎？09/25 14:44
→ turtle24: 抽gDNA的試劑同一批？09/25 14:46
→ ccjwo: 有利用之前成功過的舊gDNA當contorl，Rsa l primer一樣p不09/25 14:55
→ ccjwo: 出來，Lepr全長的primer就p的出來，抽gDNA的kit是不同組但09/25 14:55
→ ccjwo: 跑gel是有抽到gel上有band。09/25 14:55
※ 編輯: ccjwo (114.137.92.7), 09/25/2017 14:57:17
推 joseph103331: 該不會機器出毛病吧…去其他家借一下機器，或是微09/25 15:26
→ joseph103331: 調一下annealing的溫度如何？09/25 15:26
→ ccjwo: 同一台機器同一組條件,lepr有p成功但Rsa I 沒有band,試過三09/25 17:39
→ ccjwo: 種溫度50...52...55...結果都一樣...09/25 17:39
推 HateRoach: Buffer有沒有換過阿09/25 22:15
→ ccjwo: 有...整個polymerase都買新的了...09/25 22:28
※ 編輯: ccjwo (114.137.92.7), 09/25/2017 23:39:43
推 Ianthegood: 同樣的polymerase? buffer跟dNTP有換嗎 09/26 00:34
→ ccjwo: 同樣的polymerase所以用新的同牌buffer,我有用兩種不同牌 09/26 17:33
→ ccjwo: 的dNTP進行PCR,一樣只有lepr primer control有成功, Rsa I 09/26 17:33
→ ccjwo: primer一樣沒有band 09/26 17:33
推 ernielwl: 哪家廠商做的primer.該不會做錯了 09/27 00:33
推 joseph103331: Rsa片段是lepr的其中一段嗎？不然把p出來的lepr拿 09/27 03:02
→ joseph103331: 去定序，再回來對Rsa primer看現在訂的能不能黏上 09/27 03:02
→ joseph103331: 去？ 09/27 03:02
→ blence: 文中提到用lepr全長的primer,應該不是lepr基因全長吧? 09/27 22:11
→ blence: 原po好像能換都換,也都有對照,或許不是PCR反應的問題? 09/27 22:16
→ blence: 例如這類PCR-RFLP需要創造切位,往往產物小,影響跑膠觀察 09/27 22:20
→ ccjwo: 不是，我的意思是能夠p出lepr全長的control primer...是用 09/28 10:32
→ ccjwo: 來確定整個PCR reaction並沒有問題...而Rsa l primer能p出 09/28 10:32
→ ccjwo: 的長度為135 bp...在3% gel上可狠明顯的看到...接著我們再 09/28 10:32
→ ccjwo: 利用Rsa l進行digestion...wt會得到135 bp的band...+/-有三 09/28 10:32
→ ccjwo: 個band...-/-有兩個band... 09/28 10:32
→ turtle24: PCR機器最近有沒有做保養或檢測，我有遇過溫度不準的 09/28 23:56
→ turtle24: 放正中間會p不出來的那種… 09/28 23:57
推 joseph103331: 試劑都沒有問題那就回到條件上面囉，從機器、溫度 09/29 00:59
→ joseph103331: 跟primer方面著手吧，重新設計primer是否可行？ 09/29 00:59
推 csmceddie: 135bp 72度 1分鐘太久了吧 09/29 01:50
推 csmceddie: 我猜你的data應該不是完全沒夾到東西 09/29 01:52
→ csmceddie: 而是smear 所以看不到major band是嗎？ 09/29 01:53