[求救] 有人將ligation mix不小心凍去-20過嗎

[kaofei (phoebe)]

如題

我其實是想放4度的，但那時候腦袋轉太快在思考之後chloroform extract的流程，就不
小心把mix放去-20了……

一個小時後想想不對趕快拿出來，但已經結凍了QQ

之後解凍了tapping一下才放去4度

不知道這樣的意外對ligation效率的影響多大

稍微思考過，覺得也許不會到很災難, T4 應該不會因此去活，buffer也不會壞掉

比較怕DNA斷掉或ATP量下降之類的

但當然還是要等明天跑膠或downstream application一run才知道

我知道像我這樣腦殘不容易…但還是想問問有沒有人有類似經驗的

謝謝orz




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→ blence: 不管是ligase,buffer,ATP,DNA,分開放時哪個你不是放-20?
→ kaofei: 我也是這樣想的…，但實在是沒發生過類似的事所以有點緊張
→ kaofei: orz
→ chldoug: 但是ligase在-20度的時候不會結凍，配完mix再凍會變性啊
→ turtle24: 加了酵素不立刻上機？
→ kaofei: 我放4度作用，都直接丟冷藏…只是那時候想太快以為自己要c
→ kaofei: hloroform extraction了…就進-20了
→ huuban: 然後結果呢~有接上嗎?
→ kaofei: 有耶  好像影響不大，覺得走運…