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作者Illusings (旗魚)
看板Biotech
標題[求救] total RNA DNase treatment
時間Fri Oct 27 13:16:25 2017
板上各位先進大家好 小弟目前用DNase處理total RNA大致流程如下 ========================================= RNA使用trizol/phenol/chloroform萃取後 取上層液體後，沉澱→離心→乾燥→回溶 然後再加入DNase 37度C 20min 再度使用phenol/chloroform萃取(去除DNase) 取上層液體→沉澱→離心→乾燥→回溶 ========================================== 過程繁複費時 如果我在第一次上層液體中 直接加入DNase 37度C 20min 再使用phenol/chloroform萃取 取上層液體→沉澱→離心→乾燥→回溶 (節省一次沉澱、離心、乾燥的過程) 請問這樣處理是否可行？ 或是板上先進們有更好的方法呢？ 感謝各位！ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 140.121.200.159 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1509081388.A.317.html
推 duriamon: 看你要做什麼用途吧…如果是要做RT，通常用加熱就可以把 10/27 13:51
→ duriamon: DNase給幹掉了。 10/27 13:51
推 joseph103331: 應該不是不行,不過要注意反應的條件,RNA用的Trizol 10/27 14:11
→ joseph103331: 比較酸,DNase要pH7左右,所以....如果有辦法調的話 10/27 14:12
推 joseph103331: 我覺得可以查查看那些one-step的kit怎麼弄的 10/27 14:15
我要轉cDNA然後上qPCR 我會先測試一批樣本看看 再來就是去查one-step kit的資料 感謝你們！ ※ 編輯: Illusings (140.121.200.159), 10/27/2017 15:59:37
→ storm780121: 試用過抽完RNA 直接加DNase反應 然後終止 接著直接加 10/27 19:45
→ storm780121: RTase轉cDNA的kit 印象上realtime的效果ok 缺點是一 10/27 19:45
→ storm780121: 次只能翻500ng 使用上方便不少 但是價格沒印象了 XD 10/27 19:45
推 duriamon: DNase處理完再使用phenol/chloroform萃取跟本是冗步，建 10/27 20:46
→ duriamon: 議你把DNase I的使用說明看一下 10/27 20:46
推 huuban: 用TURBO的話是可以省不少步，但是通常還是會接酒精沉澱 10/27 21:06
→ huuban: 如果照他的protocol是5分鐘終止反應，1.5分鐘離心，結束 10/27 21:07
謝謝以上各位的建議 turbo看起來很方便，趕緊來去訂一套XDDD ※ 編輯: Illusings (1.169.70.199), 10/28/2017 21:55:36