[求救] 關於western blot native gel 的問題

[sunnyandsund (sunny)]

最近要跑native gel
因為以前都是跑denature gel
沒有跑過這種的
想問板上有人知道native gel的配方嗎?
我知道是沒加SDS和sample 不用煮
那我想問在作法上還有什麼不一樣嗎?
因為我在網路上查就只是少了SDS
可是怎麼上膠和下膠的tris的PH值一樣
難道native沒分上下嗎?
所以想請板上的好心人是否有配方?
以及配方的來源
感激不盡


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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 122.117.114.207
※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1514280210.A.DA1.html
→ Ianthegood: native根據你想分的dimension也有很多種喔 最常見的大
→ Ianthegood: 概是blue native page
→ sunnyandsund: 你好  我是在網路上這個地方看到這樣的配方,那這是P
→ sunnyandsund: 他的配方就是跟SDS一樣 只是少了SDS,但是她的上下膠
→ sunnyandsund: 但是她的上下膠的tris的PH值都一樣 想問這是為什麼
→ sunnyandsund: 還有這樣的話  這是屬於你說的那種BN page嗎?
→ sunnyandsund: http://www.assay-protocol.com/molecular-biology/
推 tynse71864: 點進去沒有東西耶
→ tynse71864: 另外 marker要重買
→ sunnyandsund: 呃 因為留言的字數有限 我不知道要怎麼貼完整的網
→ sunnyandsund: 那上下膠的PH值會不一樣嗎?
→ a90648: native就同I大說的有很多種，不過我覺得你還是要弄清楚
→ a90648: 為什麼SDS PAGE的上下膠PH不一樣的原因是甚麼
→ a90648: 另外可以用縮網址的網站，例如 https://goo.gl/
→ silverberry: 而且要做 western blot 的話，還要考慮到抗體能不能
→ silverberry: 辨認"native"下的蛋白質。如同樓上大師們的分享，
→ silverberry: 可能要先確定到底想要研究什麼問題。
→ sunnyandsund: 謝謝樓上的各位
→ sunnyandsund: https://goo.gl/X26GiK這個是我在網路上查到的配方
推 t0953337796: 我之前做過 native page有分上下膠，但是Tris PH值
→ t0953337796: 都是8.8 但是其他溶液的比例不一樣。SDS PAGE上面是
→ t0953337796: 用6.8是因為讓glycine帶正電，與tris帶的電性不同，
→ t0953337796: 所以可以擠壓sample，讓他從同一個起跑點出發，但是
→ t0953337796: native page是為了保有蛋白原來的結構，不能受到擠
→ t0953337796: 壓，所以結論是有分上下膠，但是Tris皆為PH8.8