[求救] 融合細胞

[migu0531 (migu0531)]

最近在做小鼠脾臟細胞和NS1細胞融合。
使用RPMI1640+L-glutamine+15%fbs+1%抗生素+sodium pyruvate

融合一陣子了，用elisa篩選陽性的細胞從96>48>24>6孔盤。
取一點點細胞去做極限稀釋，上禮拜五看融合細胞還持續分裂，就補了100ul的培養液，
今天一早發現細胞狀態不好，有些已經開始變小不圓，感覺再過幾天就往生了……

其他的細胞就擴養到小角瓶，原本在6孔盤長的好好的，擴上去覺得細胞狀態也不好，一
堆細胞飄起來和死掉……
現在完全不知道該怎麼辦，為甚麼突然死掉那瑪多?

繼代是抽一半，補一半medium。請問在細胞沒滿的情況下，繼代有需要把細胞沖起來嗎？
想問問各位前輩們，可否提供一些方法和經驗~



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→ williamyang: 通常不是會用HAT做篩選嗎?
→ Invec: HAT then HT 過程中如果細胞死掉就真的無緣了 (汙染除外)
→ Invec: 通常HAT篩選中 個人習慣不加抗生素 待clone穩定後才補回去
→ migu0531: 有喔～已經用過HAT，再做eliss挑陽性孔