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各位大大們好 小弟最近在做蛋白質分析的實驗 初步要先使用SDS-PAGE電泳觀察分子量的分佈 我先做好蛋白質的定量後開始跑電泳 濃度約位在500ug/ml上下 沒個well我大約loading 10ul 等到差不多都跑開後 用coomassie blue R250染色約30分鐘 之後開始用退色液退色 我發現 我的膠片完全沒有染出任何的蛋白質啊!!!!! 有大大們了解可能的原因在哪嗎??? 理論上我濃度測出來的量應該要可以在膠片上看的到染色吧!?!? 蛋白質也95度加熱過了 還是sample的酸鹼值會去影響跑電泳嗎??? -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 117.19.152.66 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1516764699.A.9EC.html
tynse71864: 你的蛋白來源? 另外5ug沒有很多吧 01/24 11:57
blence: 每個well,濃度,分子量分布,這些字加起來就不像跑單一蛋白 01/24 12:57
blence: 理論上是要用marker,而且要先知道R250 sensitivity 01/24 13:01
cyc5566: loading量過少,至少加到20ug 01/24 13:43
turtle24: marker有染到嗎? 同一瓶R250最近有人染過嗎? 01/24 18:57
joseph103331: loading個梯度吧,然後拿個BSA當正控制組檢查試劑 01/24 19:51
joseph103331: 當然能問實驗室的人就問,那樣比較快 01/24 19:51
Ianthegood: 你的蛋白來源跟測的方法?每種方法都有不喜歡的污染 01/25 04:07
Ianthegood: 物 01/25 04:07
shinchenboy: 我們是想把頭髮裡的蛋白質萃出來 萃取中會加入H2O2 01/25 12:23
shinchenboy: 當作氧化劑來斷雙硫鍵 但萃取後雙氧水不知怎麼去除 01/25 12:23
shinchenboy: 老闆就叫我先跑電泳看看 跑的時候有用BSA當control 01/25 12:23
shinchenboy: BSA有染出來 但我要看的蛋白質沒有 01/25 12:23
Ianthegood: 那就是沒有萃出來啊 你的protein quantitation method 01/25 19:02
Ianthegood: 大概不喜歡h2o2 01/25 19:02
blence: 有種瞎子摸象的無奈.... 01/25 22:23
shinchenboy: 可是測吸光的結果濃度是有的欸 01/26 15:29
tynse71864: 你測吸光的kit能夠承受該濃度的 H2o2嗎 如果不行則該 01/26 19:55
tynse71864: 數值與實際會有出入 01/26 19:55