[求救] 請問HEK-293細胞做免疫螢光步驟

[boulevard2 (boulevard)]

不好意思，對於這方面我還是新手，笨問題請大家鞭小力點

最近養了HEK-293細胞有HER2 express的，想要用已標上量子點的抗體做免疫螢光
第一次做實驗是用活細胞做的，效果真的很不好，細胞常常飄上來
想問一下如果做fixation有沒有甚麼要注意的，我看有人推薦用poly-lysine做coating
這是必要的嗎?還是一般protocol就好?
另外因為HER2是表現在membrane上我需要再permeabilization嗎?
謝謝大家的幫忙~~

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→ williamyang: HEK293非常不貼,用coating會最好
→ milkpa: 不用打洞，抗體選的好很容易觀察，Qdot的話
→ boulevard2: 謝謝幫忙，我會再試看看
→ xxtomnyxx: 如果抗體辨認的序列是在 HER2 膜外的部分就不用打洞，
→ xxtomnyxx: 如果是認細胞內的部分就還是要打洞
→ boulevard2: 請問如果用cool methnol可以固定嗎?
推 joseph103331: HEK293使用polylysine是必需的,而且效果會好很多
→ joseph103331: 一般還是建議先用paraformaldehyde固定,型態會較好
→ joseph103331: 除非你做不出來,再考慮是不是用甲醇等試劑