[求救] 細胞IF固定

作者ai760721 (~方吉~)

看板Biotech

標題[求救] 細胞IF固定

時間Thu Apr 12 16:33:28 2018

各位前輩好我最近要做算細胞染色體數目的實驗之前實驗室留下來的protocol是加秋水仙素O/N之後泡低張溶液然後用Methanl:Acetic acid = 3:1的固定液去固定接著滴片染DAPI 但是我老闆因為怕滴片滴的不好不容易計算染色體數目所以買了一隻CENPB的抗體來做IF再染DAPI想說會比較好計算於是乎我滴完片之後就直接接著原本IF固定完後的protocol做發現完全染不出來原本IF的protocol是用4%PFA固定之前也有先用不是metaphase的細胞測試這隻抗體照原本的protocol做是可以染出來的所以不知道是不是因為固定液不同的關係還是說我在收metaphase的細胞的時候可以改用4%PFA試試看? 麻煩各位前輩解惑謝謝 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 140.112.125.32 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1523522011.A.887.html

推 joseph103331: 用Methanol固定的原因是? 04/12 16:44

→ e104582001: 有protocol是用methanol固定，我個人覺得效果不是很好 04/12 18:45

→ e104582001: 就是了 04/12 18:46

→ ai760721: 我們實驗室留下來收metaphase cell用的固定液就是Carnoy 04/12 19:25

→ ai760721: 's fixative, 我其實不太知道是不是能換。所以上來問問 04/12 19:25

→ ai760721: 看有沒有對這比較熟的前輩能不能換成4%PFA固定 04/12 19:25

推 joseph103331: 所以想不到不行的原因那就試試看囉XD 04/12 20:23

→ joseph103331: PFA固定以後染色時要多做permeable這步 04/12 20:24

→ joseph103331: 平行測試看誰比較美比較好數 04/12 20:25

→ xxtomnyxx: 我做 IF 都是 PFA 故洞，然後用 methanol 打洞 XD 04/12 20:34

推 joseph103331: 借問一下樓上Methanol打洞的條件XD 我都用Triton... 04/12 23:26

→ xxtomnyxx: 100% methanol(放冰箱)，加到細胞後放-20 度 10 分鐘 04/13 16:32

→ tynse71864: Meoh打完洞後建議 PBS洗個5分鐘 04/14 20:34