[討論] 關於Tris-HEPES SDS-PAGE?配膠加不加SDS?

作者xxtomnyxx (翼天)

看板Biotech

標題[討論] 關於Tris-HEPES SDS-PAGE?配膠加不加SDS?

時間Fri Apr 13 20:23:31 2018

標題可能會誤導，我想問的問題有兩個： 1. 我的實驗室因為變窮了，以前都直接用 NuPAGE，現在為了省錢要自己做膠 (由奢入儉難阿....)，我想找找看除了 NuPAGE 的 system 以外 (Bis-Tris 也很貴)，有沒有其它可以讓做好的 SDS-PAGE gel，或是除了 APS 和 TEMED 以外都加好的 gel buffer 能長期保存的配方，於是我找到了 Tris-HEPES 這個 system，這個系統是用 Tris-HEPES 作為 running buffer， Gel 是用 pH 7.0 的 Tris-HCl 作為 buffer，因為 gel buffer 是中性的所以 gel 做好可以保存很久。但是除了這篇之外我卻找不到其他 Tris-HEPES SDS-PAGE 配方的資料，其他找到的都是公司在賣的 pre-cased Tris-HEPES SDS-PAGE，而且在 Thermo 的網站上還只剩 Tris-HEPES 的 running buffer 有在賣， Pierce 的 Tris-HEPES pre-cased SDS-PAGE 已經停產了。請問版上有用過 Tris-HEPES 系統的人嗎？有連 Tris-HEPES 的 gel 都是自己鑄膠的版友嗎？這個 SDS-PAGE 的系統是不是有什麼問題所以停產/沒什麼人用了？ 2. SDS-PAGE 的 gel 配方各有差異，有些配方只有 stacking gel 中有 SDS，有些配方則是 stacking 與 resolving gel 中都有包含 SDS， NuPAGE 的 Bis-Tris SDS-PAGE gel 中則是完全不含 SDS，請問自己配的 gel 中可以完全不含 SDS 嗎？是否靠 loading buffer 以及 running buffer 中的 SDS 就足夠了？謝謝大家囉～ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 120.126.39.94 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1523622214.A.77C.html

→ blence: 看起來是不是只要有便宜的precast,就不用煩惱配方了? 04/13 22:33

→ xxtomnyxx: 再怎麼便宜，也比自己配1片30元左右貴吧 04/13 23:48

→ xxtomnyxx: b 大有推薦的嗎？ 04/13 23:55

推 joseph103331: Tris-glycine系統自己鑄膠也蠻方便的啦 04/14 00:36

→ joseph103331: 總共也就6樣東西而已,實驗室工作分一分一下就配好了 04/14 00:37

但是我想要一次配好幾片放著，知後要用再拿出來用。我個人很不喜歡配藥.....

→ blence: 我不喜歡缺乏濃度可調性的precast,所以沒記過實際價格 04/14 01:34

→ blence: 找一下有往來廠商的DM有提到一片約200~250元,跟NuPAGE的 04/14 01:34

→ blence: 600元比是便宜不少,至於大量客製化廠商一時想不起來 04/14 01:36

→ blence: 另外如果要長期保存,只加APS/TEMED的產品也有 04/14 01:37

→ blence: EZ gel solution之類的關鍵字找找 04/14 01:37

可是 gel 還是不能長期保存阿...

→ blence: 補充一下,包括NuPAGE我都沒試過,不知道價格之外的實際優劣 04/14 01:40

推 osla30: Biorad TGX FastCast 一片約150我都覺得貴了，竟然還有更 04/14 09:53

→ osla30: 貴的！ 04/14 09:53

→ osla30: 另外也有Bionovas的只要A+B即可鑄膠，不需APS與TEMED，約5 04/14 10:10

→ osla30: 到10分鐘就凝固，鑄膠動作要快，一片約72元，可問問萬旺 04/14 10:10

→ osla30: 拿試用 04/14 10:10

推 jabari: 由奢入儉難啊... 04/14 10:23

→ osla30: 以上都一般Tris-glycine buffer即可，但Biorad可飆高電壓 04/14 10:25

Tris-HEPES 系統號稱 120V 可以只跑 45 分鐘。

推 uouim: 自產自推，台製GoPAGE。 04/14 18:43

GoPAGE 我家有買(NuPAGE 太貴所以後來換 GoPAGE)，但是我拿 GoPAGE 做 Western 和銀染都比 NuPAGE 糟很多......

推 tynse71864: 由儉入奢也…不容易啊 XDD 04/14 20:33

呃....所以版上都沒有用過 Tris-HEPES 的版友可以分享經驗嗎？看來我只能自己配來試試看了..... ※ 編輯: xxtomnyxx (120.126.39.94), 04/14/2018 20:59:54

→ osla30: 呃...Biorad號稱300V跑20分鐘結束 http://bit.ly/2HnCjiY 04/14 22:03

推 uouim: 覺得GoPAGE 哪裡不好呢？可以私信告訴我嗎？我們會好好改進 04/15 00:24

→ uouim: 的… 04/15 00:24

推 michealking: nupage有一片600? 05/05 01:53