[求救] 細胞離心失敗& flow cytometry

[darkfiredark (黑火)]

各位大大好，小弟最近剛踏入生物領域，

日前在把細胞切下來後，拿去離心機離心

其中有一管一直離不下來，會有像是絲狀物

卡在中央或在中下區域

1.用的是15mltube(裝到14ml)

2.400g 3分鐘 (失敗後又在離2次，結果一樣)

3.用的是 eppendorf 5810R，離心的時候，指標停在braking(是不是理論上應該要在accleration)

4.在離心前，細胞已經有一些絲狀沉澱

還有額外一個問題，大家在做flow cytometry 都是用幾盤細胞下去做?

做做細胞計數前，大家都怎麼把細胞打散均勻?

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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 24.61.246.185
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推 joseph103331: 首先先確認離心機有沒有轉,可以增加一點離心時間
→ joseph103331: 大概5min左右, 拿出來倒掉上清, 先用手輕彈離心管
→ joseph103331: 至沉澱散開, 再加適量的培養基用pipet的方式打散
→ joseph103331: 要吸吐幾下看細胞種類, 可以從計數器的均勻程度判斷
感謝大大建議
→ tynse71864: 切下細胞後有加入含血清的培養基再離心嗎? 有時候加的
我沒有在加培養基
→ tynse71864: 量太少會這樣 ；建議是加入3倍以上 trypsin體積的培養
→ tynse71864: 基做中和
→ tynse71864: acc只是顯示加速度多少吧，braking是指離心停止時會有
→ tynse71864: 摩擦力去提升降速
→ tynse71864: 離心機有沒有轉摸一下外殼應該就知道了
※ 編輯: darkfiredark (24.61.246.185), 04/18/2018 07:40:53
推 joseph103331: 切完以後一定要加培養基中和trypsin，也有人加10倍
→ joseph103331: PBS稀釋，作用過頭細胞雖不會破，但會因為表面蛋白
→ joseph103331: 消失不再貼附，也會死掉。
→ joseph103331: 為免誤會解釋一下，是10倍體積的PBS~
推 MDCCLXXVI: 絲狀沈澱應該是細胞被切爛了
推 shinink: 絲狀也有可能是細胞太滿 切下來聚集成絲狀
基本上是因為這樣，拿到顯微鏡下看，絲狀物確實有著一堆細胞
※ 編輯: darkfiredark (24.61.246.185), 04/20/2018 08:07:55
→ xxtomnyxx: 可是會變成絲狀通常就是有細胞破掉了，DNA跑出來把細胞
→ xxtomnyxx: 纏在一起，不然只要pipet幾次應該還是會散掉
推 greenmoon00: Flow部分,不同實驗需求的細胞數不太一樣,先看看你要
→ greenmoon00: 做啥？
推 greatime: Trypsin 過頭了，做用完一定要快一點加入含FBS的medium
→ greatime: 或FBS，怕打不散就用大量PBS稀釋，重點是要快，來不及就
→ greatime: 一次不要處理超過兩盤細胞