推 lingon: DNase用多了會影響RNA品質,可以考量下游的試驗需要多純的 04/25 10:30
→ lingon: RNA再決定如何處理 04/25 10:30
→ xxtomnyxx: 抽 RNA 有 gDNA 參雜其實很常見，主要是看你後續的實驗 04/25 14:14
→ xxtomnyxx: 會不會被 gDNA 干擾，不會的話就可以不理它 04/25 14:14
推 joseph103331: gDNA很難完全去除,所以control會一大堆 04/25 14:16
→ joseph103331: 主要原因之一就是排除gDNA的訊號 04/25 14:16
→ linpooh1029: 我是用在miRNA qpcr, primer 設計辨認poly A,但我們 04/25 15:25
→ linpooh1029: 是認為g DNA上也會有會影響到 04/25 15:25
→ linpooh1029: @lingon 我出來的DNA量在gel都是多於RNA的QQ 04/25 17:47
→ xxtomnyxx: miRNA qPRC primer 怎麼會設計在 polyA 上？ 04/25 18:53
→ linpooh1029: 我們miRNA也是用kit的 04/25 19:03
推 joseph103331: 同樓上問題 04/25 19:04
推 joseph103331: polyA感覺是自己加上去的 04/25 19:06
→ xxtomnyxx: 嗯，你放那張圖不妥，省略掉 polyA polymerase 的處理 04/25 20:31
→ xxtomnyxx: 會讓人困惑。 04/25 20:31
→ xxtomnyxx: 從這個實驗的原理看來 gDNA 理論上不會有影響。你要是 04/25 20:37
→ xxtomnyxx: 真的擔心會有影響，就做幾次拿少量你抽的 RNA 用 RNase 04/25 20:37
→ xxtomnyxx: A 處理過再做一樣的 polyadenylation、RT 和 qPCR。 04/25 20:37
→ xxtomnyxx: 測不到訊號就表示不會有影響。 04/25 20:37
→ xxtomnyxx: 另外，column 抽 RNA 真的要抽得很爛才會 gDNA 比 RNA 04/25 20:39
→ xxtomnyxx: 多，一般這都是表示你 sample over loading 了 04/25 20:39
推 huuban: 看你的樣本吧..如果是非模式物種真的甚麼怪事都會有的 04/25 21:45
→ huuban: 我以前玩LNA miRNA qPCR的DNase是用別的牌子做的 04/25 21:46
→ huuban: 吃不乾淨我們會再吃一趟，通常兩趟會乾淨的 04/25 21:47
→ linpooh1029: 這圖是kit附的哈哈， 他是後來加上polya沒錯，但就 04/25 21:59
→ linpooh1029: 是怕那段reverse primer會跑到gdna，不知道前輩們覺 04/25 21:59
→ linpooh1029: 得有沒有可能QQ 04/25 21:59
→ linpooh1029: 我是抽mice embryo 現在是拿embryo不要的部位測試ki 04/25 22:01
→ linpooh1029: t。 04/25 22:01
→ linpooh1029: 謝謝各位大大的幫忙QQ 04/25 22:01
推 bioresearch: Biorad好像有kit可以解決，業務推過，問問應該有 05/29 22:27