→ xxtomnyxx: 這部份我不熟,很抱歉給不了幫的上忙的意見,但是我還08/04 22:25
→ xxtomnyxx: 是得說一句:作研究怕花錢是成不了事的。08/04 22:26
推 qiet: 看看廠商有沒有試用的08/05 00:57
推 joseph103331: 也可以試試看電質體比較便宜 或是用Lenti感染08/05 11:35
→ joseph103331: Lenti不想篩藥就用螢光蛋白質去篩08/05 11:36
其實同時有用三條 shRNA (已包成病毒)去分別感染
但篩藥一週後看起來是沒有KD效果…
(我用 wb 去看) 所以才會想改用 sirna
而且我已經花一個月在等這三個 shRNA了,沒那麼多時間等下一個…
推 poison7202: KD效率差,別忽略了這一條shRNA可能KD不夠好,測試一08/05 15:28
→ poison7202: 下比較好唷!08/05 15:28
→ xxtomnyxx: 我超討厭做 shRNA vector,可能做 5 個只有 1 個有用..08/05 16:49
→ blence: 沒有在其它細胞先試過transfection efficiency?08/05 17:49
→ blence: 阿,我是要說KD efficiency08/05 17:54
我自己沒有拿其他細胞試過,會在用293試試看
別人的 paper用同樣的 shRNA ,在 Hela 跟 primary fibroblast大概都有90% KD
→ blence: paper來的,所以是addgene買的/要來的,還是找人代工接嗎?08/05 18:28
→ blence: 我覺得如果1.control viral GFP vector在jurkat效率夠好08/05 18:35
→ blence: 加上2.在其它細胞測試過KD效率可以;那應該不需更改設計08/05 18:35
shRNA是TCRN系列,請RNAi core 協助包成病毒的
我沒有GFP virus,只有scramble;
但不論是scramble 或是target組, infect完puro藥篩 存活率有8-9成 (沒感染的全死
所以送進去的效率應該是好的
※ 編輯: tynse71864 (140.109.113.67), 08/05/2018 20:48:06
推 kuror: 有試過Dharmafect嗎? 有查到可以送Jurket細胞,而且送一次08/07 10:55
→ kuror: 只需100uM 5nMol的siRNA應該非常夠用才是08/07 10:56
剛從家裡冰箱翻到……
可能順便測試 RNAiMAX / Genmute
有 data會在回報的,感謝大家
※ 編輯: tynse71864 (223.137.121.177), 08/07/2018 13:42:46